《miR-449b調控CSFR1影響子宮內膜異位種植的分子機制》是依託復旦大學，由史穎莉擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-449b調控CSFR1影響子宮內膜異位種植的分子機制
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：史穎莉
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
內異症是臨床常見婦科疾病，病因未明而無根治手段。miR-449b是我們通過二代測序技術篩選到的一條在人內異症異位內膜、在位內膜中顯著降調的miRNA。預研結果發現：抑制miR-449b表達促進內膜細胞的增殖與侵襲性，減少凋亡；生物信息學預測CSF1R是其靶基因，抑制miR-449b可上調CSF1R表達。鑒於內異症中CSF1R及其配體CSF-1高表達，並促進異位灶形成，因此提出miR-449b通過調控CSF1R影響子宮內膜異位種植的科學假說。本研究擬論證miR-449b在內異症中的生物學特徵；通過過表達、沉默表達，從正反兩方面論證miR-449b 對子宮內膜細胞功能影響及腹腔微環境變化影響；以CSF1R 為切入點，深入探討miR-449b 在子宮內膜細胞異位種植過程中的分子機制；通過內異症動物模型在體評價miR-449b的功能。本研究將有助於理解內異症發病機制，有望為其防治提供新的干預靶標。
結題摘要
子宮內膜異位症（內異症）因其病因未明，尚無有效治療方法。多篇文獻和我們的前期研究表明：微小RNA（miRNA）在內異症的發生髮展過程中發揮作用，涉及細胞增殖、凋亡和分化等重要生物學過程。本研究小組根據生物晶片技術篩查結果，以miR-449b為研究對象進行研究。結果發現：miR-449b-3p在異位內膜和在位內膜中均表達下降，提示其在內異症中可能具有重要作用。為驗證該假說，通過過表達策略，探討miR-449b對人子宮內膜間質細胞功能的影響，結果顯示：miR-449b-3p過表達可抑制細胞生長，促進血管新生，而對細胞凋亡、侵襲等功能無明顯影響。因此得出初步結論：miR-449b-3p能夠通過調節ESC生長和血管新生在內異症發生中起作用。 為進一步驗證該結論，我們構建內異症小鼠模型，用miR-449b-3p干預，設立agomir NC組和miR449b-3p agomir組，結果發現：miR-449b-3p組在異位灶體積和重量上較對照明顯降低 （P＜0.05）；CD34表達較NC組較少（P＜0.05）；MMP2、TIMP-1、COL18A1在miRNA-449b組表達有上升，其中COL18A1顯著上升（P＜0.05），而CD31、VEGF表達下降（P＜0.05）。提示miR-449b通過調控血管新生相關蛋白影響內異灶形成。 鑒於miRNA通過調控下游靶基因參與細胞功能。我們首先採用生物信息學分析預測CSF1R可能為下游靶基因，但qPCR實驗結果否定了該推斷。為了系統篩選出內異症中miR-449b調控的下游靶基因，我們利用晶片檢測技術篩選ESC過表達miR-449b後發生變化的下游靶基因，發現了45個下調基因。根據GO databases, pathway分析和pubmed文獻報導，我們確定了3個與血管新生密切相關的基因（TMSB10、MT-ND5、MT2A）。經免疫印跡試驗篩選發現：ESC分泌MT-ND5蛋白,但過表達miR-449b後表達差異不顯著，無 TMSB10和MT2A 蛋白表達。本研究證實：miR-449b的異常表達致細胞和動物水平血管新生變化，推測其為內異症發生髮展的因素之一，但該miRNA表現功能不夠強大、發揮的作用有限，由於後期機制研究中靶基因篩查未得到陽性結果，對其研究的機制未得到理想闡明。由於以上原因，研究未按原計畫完成，僅發表SCI 論文1篇。
