《miR-320家族與RACK1的關係及其對乳腺癌侵襲轉移的作用和機制》是依託復旦大學，由劉秀萍擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-320家族與RACK1的關係及其對乳腺癌侵襲轉移的作用和機制
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉秀萍
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們在國內外率先報導：RACK1是優於任何目前常用的評價乳腺癌預後參考指標的蛋白；通過miRNA晶片結合軟體分析和預實驗結果推斷：miR-320家族參與RACK1表達的調節。但miR-320家族與RACK1之間的調節關係及其對乳腺癌侵襲轉移的作用和機制、miR-320家族表達的調節等問題尚不清。本研究擬採用螢光素酶報告基因系統確定RACK1與miR-320家族直接作用的存在，使用miR-320前體和抑制劑轉染等法，通過體內、外實驗兩方面研究，明確miR-320與RACK1的相互調節、表達及與乳腺癌侵襲轉移和病人預後的關係；並揭示其參與乳腺癌侵襲和轉移的分子機制；用ChIP-PCR和啟動子報告基因等方法，確定調控miR-320家族成員的轉錄因子和闡釋miR-320-RACK1涉及的相關分子通路。從而為臨床預測乳腺癌轉移和預後提供新的生物學指標及有效的治療靶點。
結題摘要
乳腺癌是危害婦女健康的常見惡性腫瘤，2012年新增乳腺癌患者167萬，發病率位居全球女性腫瘤的首位。腫瘤的侵襲和轉移是影響其療效，導致腫瘤病人死亡的主要因素。近年，microRNA（miRNA）在腫瘤發生髮展中作用的研究成為熱點。 本課題對全基因組miRNA晶片篩選出的人正常乳腺上皮細胞和乳腺癌細胞之間差異表達明顯的miR-320a進行了如下深入研究。①通過實時螢光定量PCR法在細胞系和19對新鮮乳腺冰凍組織樣本檢測了miR-320a水平，發現miR-320a在高侵襲力乳腺癌細胞中顯著低表達，及在新鮮乳腺癌組織中的表達明顯低於正常乳腺組織；同時，採用原位分子雜交技術檢測了miR-320a在130例浸潤性乳腺癌組織中的表達和分析了其與臨床病理學指標的關係，結果顯示miR-320a在浸潤性乳腺癌中的表達水平和乳腺癌腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM分期、遠處轉移和預後負相關。②採用脂質體介導法分別將Pre-miR-320a及Anti-miR-320a轉染人乳腺癌細胞，採用CCK-8法和流式細胞技術檢測miR-320a對人乳腺癌細胞增殖的作用，使用transwell實驗檢測miR-320a對乳腺癌細胞遷移和侵襲行為的影響。研究表明，轉染Pre-miR-320a或Anti-miR-320a可上調或下調乳腺癌細胞的miR-320a表達水平，與對照組相比，上調或下調miR-320a的表達水平對乳腺癌細胞增殖無明顯影響；但升高miR-320a表達可以明顯抑制乳腺癌細胞的遷移和侵襲能力。 ③為了探索miR-320a抑制乳腺癌細胞遷移和侵襲作用的分子機制，我們對生物信息資料庫預測獲得的miR-320a可能靶基因完成了雙螢光素酶報告基因實驗驗證，結果表明miR-320a通過與其靶基因MTDH和Rab14的直接作用在乳腺癌發揮抑制癌細胞侵襲/遷移和轉移過程。並且，實驗證實MTDH可部分逆轉miR-320a介導的遷移和侵襲抑制作用，及Rab14蛋白表達與乳腺癌患者的預後正相關。 我們課題的完成全面揭示了miR-320a在乳腺癌侵襲和轉移過程中的作用及其分子機制，為乳腺癌治療提供了新的可能的生物學靶點。
