《miR-27a參與Myostatin和亮氨酸調節豬成肌細胞增殖分化的功能研究》是黃志清為項目負責人，四川農業大學為依託單位的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-27a參與Myostatin和亮氨酸調節豬成肌細胞增殖分化的功能研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：黃志清
- 依託單位：四川農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
前期研究確證了小鼠Myostatin為miR-27a的靶基因並發現C2C12細胞增殖過程中小鼠Myostatin與miR-27a表達規律相反。經分析得出豬Myostatin也可能為miR-27a的靶基因。基於miR-27a與豬Myostatin間存在相互調控作用並以此參與Myostatin抑制豬成肌細胞增殖分化功能的科學假設，本項目擬採用基因過表達和基因沉默技術特異性調控miR-27a和豬Myostatin的表達，以豬成肌細胞為對象，弄清miR-27a與豬Myostatin之間是否存在相互調控作用，闡明Myostatin抑制豬成肌細胞增殖分化是否需要miR-27a的參與，在此基礎上，闡明亮胺基酸對豬成肌細胞增殖分化的影響及miR-27a和Myostatin詮釋的作用機理。開展本項目研究，對於進一步認識骨骼肌大小調節機制、深入開展營養對豬肉產量和品質的調控作用及其機制研究具有重要意義。
結題摘要
本項目成功分離出經免疫組化和免疫螢光鑑定過的高純度的豬成肌細胞。在成功克隆獲得豬Myostatin 3'UTR全長序列的基礎上，採用螢光素酶報告基因分析方法證實了豬Myostatin為miR-27a的靶基因。在豬心臟和脂肪組織以及豬成肌細胞增殖過程中，miR-27a的表達與豬Myostatin的表達呈負相關。功能研究表明，過表達miR-27a促進了豬成肌細胞的增殖並下調了豬Myostatin的表達，而過表達豬Myostatin抑制了豬成肌細胞的增殖並下調了miR-27a的表達。C2C12細胞上的研究也得到了類似的結果。功能研究同時表明，過表達miR-27a下調了分化過程中細胞內Myogenin的表達，而抑制miR-27a則相反，從而證實了miR-27a具有抑制豬成肌細胞分化的功能。此外，探討了亮氨酸對豬成肌細胞和C2C12細胞增殖分化的影響及機理，結果表明，亮氨酸可促進細胞增殖、上調miR-27a表達以及下調Myostatin表達，miR-27a抑制劑削弱了亮氨酸的促細胞增殖作用。結果同時表明，亮氨酸可促進豬成肌細胞的分化，並反饋性引起Myostatin的上調。綜上結果表明，豬Myostatin與miR-27a間存在相互調控作用，miR-27a具有促進豬成肌細胞增殖並抑制細胞分化的功能並通過其靶基因Myostatin實現，miR-27a可被亮氨酸誘導表達且在亮氨酸促成肌細胞增殖功能中發揮了重要的作用。項目研究結果對進一步認識骨骼肌大小調節機制、深入開展營養對豬肉產量和品質的調控作用及其機制研究具有重要意義。
