《lncRNA MALAT1通過SF2/ASF調控癌基因RON剪接促進膀胱癌演進的機制研究》是依託中山大學，由黃健擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：lncRNA MALAT1通過SF2/ASF調控癌基因RON剪接促進膀胱癌演進的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：黃健
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
研究表明長片段非編碼RNA（lncRNAs）表達異常在腫瘤中起著促癌/抑癌的作用。我們前期研究表明lncRNA MALAT1在膀胱癌中過表達，而根據報導MALAT1在其他細胞過表達可導致RNA剪接蛋白SF2/ASF活性增加，產生癌基因RON的持續活化的異構體ΔRON，促進腫瘤的增殖和轉移。我們進一步預實驗證實膀胱癌組織中存在ΔRON表達。由此，我們提出：MALAT1通過促進SF2/ASF磷酸化調控癌基因RON剪接促進膀胱癌演進和轉移。本研究擬通過調控MALAT1表達觀察膀胱癌細胞增殖、浸潤、上皮-間質轉化和轉移能力的改變，通過過表達/敲低技術，獲得MALAT1通過SF2/ASF產生異構體ΔRON的可靠依據，為膀胱癌靶向治療提供新的思路。分析MALAT1與膀胱癌臨床病理指標的關係，確定MALAT1是否可作為判斷膀胱癌惡性程度和預後獨立指標，指導臨床實踐。
結題摘要
膀胱癌是我國泌尿男生殖系統最常見的惡性腫瘤，具有易復發、進展、轉移特點。膀胱癌發病機制未明，可能與癌基因的激活及抑癌基因的失活，導致細胞生長失控有關。長片段非編碼RNA lncRNA（long non-coding RNA,＞200bp）是非編碼RNA的一種，它可以在多種層面上調控基因的表達。有關lncRNA在腫瘤中的作用及其功能研究剛處於起步階段，有研究表明lncRNA在一些腫瘤中異常表達，並通過對下游靶基因調控，在腫瘤發生、發展、轉移中行使著重要的癌基因或抑癌基因的功能。lncRNA 在膀胱癌中的表達及作用尚未闡明。在我們的研究中，我們通過RT-qPCR發現lncRNA-MALAT1在膀胱癌組織中高表達，進一步我們使用原位雜交及螢光原位雜交技術檢測了100例膀胱癌及其癌旁組織的MALAT1的表達，發現其中79例MALAT1在癌組織中高表達，其表達水平與淋巴結轉移相關。進一步分析 MALAT1 與膀胱癌臨床指標的關係，我們發現MALAT1高表達與膀胱癌患者淋巴結轉移和預後不良相關，可作為判斷膀胱癌預後的指標。通過細胞功能研究發現，敲低MALAT1能夠抑制膀胱癌的增殖、克隆形成和遷移、侵襲能力，通過western blot發現敲低MALAT1導致上皮型細胞分子標記E-Cadherin表達升高，間質型細胞分子標記Vimentin和Fibronectin表達降低，抑制膀胱癌細胞的上皮-間質轉化。進一步證實MALAT1 敲低可導致 RNA 剪接蛋白 SF2/ASF 活性增加，但ΔRON的表達水平並未發現明顯改變。進一步的基因晶片分析發現，敲低MALAT1表達導致腫瘤侵襲趨化相關的MMP9、CCL20，與腫瘤細胞增殖相關ERBB3、ERBB4，發揮癌基因作用的長非編碼RNA H19等表達均明顯下降，而發揮抑癌基因作用的長非編碼RNA MEG3等則表達明顯上升。ELISA證實，MALAT1敲低導致膀胱癌細胞分泌MMP9明顯減少。體內動物實驗也證實，MALAT1敲低導致膀胱癌細胞皮下成瘤能力和遠處轉移能力減弱。我們的研究結果為膀胱癌治療提供新的思路和理論依據，具有重要的理論及臨床意義。
