Klenow片段

大腸桿菌的DNA 聚合酶I經過枯草桿菌蛋白酶(或胰蛋白酶) 處理後，原來的酶分子切成兩個片段，其中大片段分子質量為76kD,小片段分子質量為34kD。該大片段通常稱為Klenow 片段，通過克隆技術也可以獲得Klenow 片段。

Klenow片段，又名大片段（克列諾片段，Klenow fragment，或稱克列諾酶，Klenow enzyme）：E.coli DNA聚合酶Ⅰ經胰蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶部分水解生成的C末端605個胺基酸殘基片段。該片段保留了DNA聚合酶I的5ˊ-3ˊ聚合酶和3ˊ-5ˊ外切酶活性，但缺少完整酶的5ˊ-3ˊ外切酶活性。DNA聚合酶 I（DNA-pol I）斷開後的存在另一個323個胺基酸殘基片段，保留5‘-3’外切酶活性。

基本介紹

• 中文名：Klenow片段
• 外文名：Klenow fragment
• 發現時間：1970年
• 發現者：漢斯·克列諾

功能作用

Klenow片段常用於cDNA第二鏈合成，雙鏈DNA3ˊ-末端的標記等。

大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一個片段，只有在5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性，失去了5’→3’外切酶活性。它可用於填補DNA單鏈末端成為雙鏈。

如果供給32P標記的三磷酸核苷酸，則可使DNA帶上同位素標記。當用交錯切割的限制酶切成帶有單鏈粘性末端的DNA片段，要用被切成平頭末端的DNA片段連線時，可以先用Klenow片段使粘性末端的單鏈補齊成為平頭，然後在DNA連線酶作用下把兩個DNA片段連線起來。

發現過程

是漢斯·克列諾於1970年用枯草桿菌蛋白酶（subtilisin）處理大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ時，得到的兩個片段中分子量較大的一個。