Vps4通過調節exosomal microRNA表達譜參與肝癌細胞EMT調控的機制研究

《Vps4通過調節exosomal microRNA表達譜參與肝癌細胞EMT調控的機制研究》是依託中山大學，由呂麗虹擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：Vps4通過調節exosomal microRNA表達譜參與肝癌細胞EMT調控的機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：呂麗虹
• 依託單位：中山大學

中文摘要

Exosomes分泌途徑在肝癌的發生髮展過程中起著重要作用。我們的前期研究發現其關鍵性調節因子Vps4在人肝癌組織中低表達。進一步的研究發現，上調Vps4能明顯抑制肝癌細胞的增殖和侵襲轉移能力；同時小RNA測序結果顯示細胞和exosomes中miRNA表達譜發生改變；並且上調Vps4後，肝癌細胞E-cadherin蛋白表達增強。提示Vps4可能作為抑癌基因通過exosomes分泌途徑調節肝癌細胞miRNA表達譜參與EMT調控過程。為深入闡明其機制，本課題擬開展以下研究：①上調Vps4，觀察肝癌細胞和exosomes中miRNA表達譜的變化，並分析參與調控EMT過程的信號通路；②將處理後肝癌細胞分泌的exosomes與未處理細胞共培養，觀察對其侵襲轉移能力的影響。本課題旨在揭示Vps4通過調節exosomal miRNA表達譜參與EMT調控改變肝癌細胞侵襲轉移能力，為肝癌的治療開拓新思路。

結題摘要

肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，腫瘤的復發轉移是導致肝癌預後不良的主要原因。目前，肝癌的發生、發展、轉移等機制尚未完全闡明。上皮-間質轉化（epithelial-to-mesenchymal transition, EMT）被認為在大部分腫瘤（包括肝癌）的轉移中扮演著重要角色。此過程可由多種信號通路介導，但在來源不同的腫瘤和不同的腫瘤微環境中，具體的介導機制有所不同。本課題組的前期研究結果發現，Vps4A可以通過調節Exosome及其來源細胞的miRNAs而發揮抑癌作用。然而，Vps4A是否影響肝癌的EMT過程及其具體作用機制並不清楚。我們為解決這一系列問題進行了相關研究。主要結果如下：1.過表達Vps4A抑制肝癌細胞的侵襲、浸潤和EMT過程。在構建了SMMC7721和MHCC97H過表達Vps4A的細胞穩定株後，我們通過細胞劃痕、transwell小室、western blot、qPCR及免疫螢光等方法檢測了細胞侵襲和遷移、EMT相關標誌物的變化。結果表明，過表達Vps4A後，細胞的浸潤和遷移受到明顯抑制，同時上皮細胞標誌物水平升高，而間質細胞標誌物水平明顯下降。另外，通過免疫組化及查詢分析公共資料庫TCGA的數據等發現，Vps4A的表達量和EMT表型具有相關性。2.β-catenin 通路介導了Vps4A對肝癌細胞的EMT的抑制作用。Western blot、核蛋白檢測及qPCR等結果表明，過表達Vps4A後，β-catenin核內蛋白量及其活性均降低。而過表達β-catenin可以補救由於過表達Vps4A引起的對EMT的抑制作用。 3. Vps4A通過β-catenin通路抑制肝癌細胞的EMT過程可（部分）由exosome介導。western blot、qPCR及免疫螢光結果顯示將過表達Vps4A細胞來源的exosome加入對照組細胞後48小時，β-catenin的蛋白水平開始下降，72小時後，EMT相關標誌物水平開始變化。同時，對照組細胞的浸潤和遷移能力也受到一定程度的抑制。綜上可知，Vps4A可通過β-catenin通路抑制肝癌細胞的EMT過程，而這一過程至少部分是由exosome所介導。這為我們進一步研究Vps4A的作用機制及其對肝癌細胞EMT過程的調節奠定了良好基礎。