Tiam1調控JNK通路對喉癌放療敏感性的影響及機制研究

《Tiam1調控JNK通路對喉癌放療敏感性的影響及機制研究》是依託中南大學，由王爽擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：Tiam1調控JNK通路對喉癌放療敏感性的影響及機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：王爽
• 依託單位：中南大學

項目摘要

Tiam1在惡性腫瘤的發生髮展中起重要作用。JNK/ATF-2信號通路與惡性腫瘤的放療敏感性密切相關，而Tiam1是JNK/ATF-2信號通路的重要調節因子。我們前期研究發現：Tiam1在喉癌組織中呈高表達，其能顯著影響喉癌病人的預後。而放療是喉癌的主要治療方法之一。因此，我們推測Tiam1可能通過調控JNK通路影響ATF-2的表達進而影響喉癌的放療敏感性。本項目從體外及體內水平，首先通過質粒轉染及RNA干擾技術分別上調及下調Tiam1的表達，運用RT-PCR、Western blot、集落形成實驗、流式細胞術及TUNEL檢測等技術研究Tiam1的表達對放療敏感性的影響；繼而通過RNA干擾技術分別沉默JNK及ATF-2在喉癌中的表達，研究Tiam1是否通過JNK/ATF-2通路影響放療敏感性。本項目首次探討Tiam1對喉癌放療敏感性的影響及相關機制，為喉癌放療敏感性研究奠定了新的理論基礎。

結題摘要

Tiam1在惡性腫瘤中起重要作用。JNK/ATF-2通路與惡性腫瘤的放療敏感性相關，而Tiam1是JNK/ATF-2通路的調節因子。我們發現Tiam1在喉癌中呈高表達，其能影響喉癌的預後。而放療是喉癌的治療方法之一。因此，我們推測Tiam1可能通過調控JNK/ATF-2通路影響喉癌的放療敏感性。為了驗證此推測，本項目從體外及體內水平，首先通過上調及下調Tiam1的表達，運用相關實驗研究Tiam1表達對放療敏感性的影響；繼而分別沉默JNK及ATF-2的表達，研究Tiam1是否通過JNK/ATF-2通路影響放療敏感性。 目前，課題組已經成功構建下調及上調錶達穩定的喉癌Hep-2細胞株。通過Western blot發現Tiam1可能是通過影響JNK、ATF-2的活性進而對JNK/ATF-2通路產生作用。而後，在Tiam1過表達的細胞中分別下調JNK及ATF-2的表達，Western blot顯示JNK及ATF-2的下調能夠逆轉因Tiam1上調引起的JNK/ATF-2通路因子的磷酸化。此結果進一步說明Tiam1是在JNK/ATF-2通路的上游來發揮其影響。 之後我們對各組細胞進行放射處理，採用集落形成實驗檢測增殖能力，流式細胞術檢測凋亡情況。實驗表明，Tiam1下調後克隆形成數明顯降低，但凋亡細胞率增高；而Tiam1上調後克隆形成數增多，但凋亡細胞率降低，這些表明Tiam1的表達量與Hep-2細胞的放療敏感性呈正相關。而在過表達Tiam1同時下調JNK或ATF-2的細胞中，其克隆形成數降低，而凋亡細胞率增加，這說明Tiam1是通過調節JNK/ATF-2通路影響喉癌的放療敏感性。 最後我們利用構建好的各組細胞，建立裸鼠皮下種植瘤，進行放射處理後測量腫瘤體積及重量，檢測各組種植瘤的凋亡和JNK/ATF-2通路因子的表達。結果表明，Tiam1上調組的種植瘤體積及瘤體重量均增高；而Tiam1下調組則降低。TUNEL法顯示，Tiam1上調組中雙染細胞數量減少，而Tiam1下調組則增多。Western blot發現Tiam1上調組中JNK/ATF-2通路因子的表達均升高，而Tiam1下調組中則減低。因而，我們從體內水平進一步證明了體外實驗的結果。 Tiam1作為與腫瘤密切相關的蛋白，對其影響放療敏感性及機制的探討有助於找出新靶點，從而採取有效的干預措施，對提高腫瘤放療療效有重要意義。