《TRPC3膜定位及其下游信號通路影響卵巢癌順鉑耐藥的機制》是依託復旦大學，由陶祥擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：TRPC3膜定位及其下游信號通路影響卵巢癌順鉑耐藥的機制
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：陶祥
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
鉑類藥物為主的化療是卵巢癌治療的重要手段，腫瘤耐藥導致約80%的患者因復發而死亡。目前鉑類耐藥研究主要圍繞p53依賴的DNA修復途徑，而發病率最多的高級別漿液性癌是p53突變型。因此，在卵巢癌中開拓非p53依賴的耐藥機制研究，具有重要的科研及臨床意義。申請人以往觀察到高表達瞬時受體電位通道蛋白(TRPC)3患者傾向早期復發；且化療後復發腫瘤TRPC3較化療前有所增加；耐藥細胞株的TRPC3亦有增加；體外抑制卵巢癌細胞TRPC3可部分恢復對順鉑的敏感性。結合文獻報導窖蛋白(Cav)-1參與TRPC3細胞膜上定位的調控，假設Cav-1對TRPC3定位的調控參與順鉑耐藥。本課題將就調控TRPC3膜定位的相關蛋白及其下游信號分子與順鉑耐藥進行深入探討，尋找有效逆轉順鉑耐藥的靶分子。這是首次在卵巢癌開展TRPC3相關的耐藥機制的研究，將為以TRPC3為靶點的卵巢癌治療提供理論依據。
結題摘要
鉑類藥物為主的化療是上皮性卵巢癌治療的重要手段，腫瘤耐藥性導致約80%左右的患者因復發而死亡。本研究基於以往工作基礎，探討TRPC3與順鉑化療耐藥的關係。本研究體外誘導卵巢癌細胞株HEY，製備耐藥細胞株HEYcp，其5 μg/ml和20 μg/ml的順鉑的抑制率降低54.3%和47.4%。並與文獻中明確的順鉑敏感株A2780和耐藥株A2780cp（5 μg/ml和20 μg/ml抑制率降低29.0%和24.2%）進行體外實驗，以證實TRPC3通路與順鉑耐藥之間的關係。體外實驗觀察到，耐藥細胞株HEYcp與A2780cp的TRPC3的蛋白表達為敏感株HEY和A2780的1.80和1.74倍；Cav-1和表達為2.66和3.26倍。50例卵巢高級別漿液性癌的術後化療後復發的標本中可見到，TRPC3與Cav-1的表達與首次手術切除腫瘤標本相比均有增加，且具有統計學差異。採用細胞核、細胞質和細胞膜分離技術處理培養的細胞株，提取蛋白免疫印跡檢測，觀察到TRPC3與Cav-1蛋白在耐藥株與敏感細胞株相比，細胞核和細胞質中的含量均降低，而細胞膜上表達增高。免疫共沉澱觀察到TRPC3與Cav-1可相互結合，提示兩者相互的調控作用。用Cav-1結合域表達質粒轉染HEYcp細胞株，共聚焦顯微鏡觀察，可見TRPC3在細胞膜上的定位減少。在TRPC3穩轉株中，抑制TRPC3下游分子Calpain、Akt和Bcl-2可部分削弱TRPC3的誘導耐藥作用，說明TRPC3的耐藥機制與下游分子相關。使用TRPC3的抑制劑抑制其功能或採用shRNA穩定敲減其表達水平，均能有效恢復細胞對順鉑的敏感性，表現在凋亡水平增加、細胞侵襲和細胞集落形成能力降低。提示以TRPC3-Cav-1-Calpain為靶點的卵巢癌治療可能逆轉腫瘤對順鉑藥物的敏感性。
