《Nrf2-Keap1信號通路與自噬在卵巢癌順鉑耐藥中的串話》是依託復旦大學，由易曉芳擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Nrf2-Keap1信號通路與自噬在卵巢癌順鉑耐藥中的串話
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：易曉芳
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Nrf2作為轉錄因子廣泛存在於全身多器官。Nrf2 - Keap1信號通路除了在維持細胞氧化還原方面起重要作用外，還參與腫瘤耐藥，但其機制不明。我們的預實驗結果提示 Nrf2的表達與卵巢癌細胞對順鉑的敏感性有關，而對順鉑耐藥的卵巢癌細胞自噬活性增強，此外，抑制Nrf2mRNA的表達會改變細胞的自噬活性。為此，我們提出假說：Nrf2可能通過與自噬的串話共同參與了卵巢癌的順鉑耐藥機制。 為驗證這一假說，我們將通過人卵巢癌細胞系和裸小鼠人卵巢癌原位移植瘤模型，採用分子標記、免疫印跡、腺病毒載體轉染、RNA干擾、電鏡以及高通量染色質免疫共沉澱晶片等手段， 從分子、細胞、及動物整體水平等多方面探討 Nrf2與自噬在卵巢癌耐藥中的作用、及其相互影響，深入揭示Nrf2-Keap1信號通路在卵巢癌鉑類耐藥中的作用，並全面評價自噬在卵巢癌鉑類耐藥中的動態改變，豐富順鉑耐藥機制，為卵巢癌化療提供潛在的新靶點。
結題摘要
本課題的科學假說是：Nrf2可能通過與自噬的串話共同參與了卵巢癌的順鉑耐藥機制。為探討Nrf2-Keap1信號通路及自噬在卵巢癌順鉑耐藥中的作用及二者可能的相互調控機制，我們採用卵巢癌順鉑敏感細胞株A2780及其對應的耐藥細胞株A2780cp，通過蛋白印跡、免疫標記、RNA干擾、電鏡、實時定量聚合酶鏈式反應等方法，從分子、細胞水平進行研究。結果顯示，順鉑耐藥細胞中自噬活性顯著高於順鉑敏感細胞，採用3-MA藥物抑制自噬或RNA干擾下調自噬活性，顯著增加耐藥細胞對順鉑的敏感性。此外，Nrf2及其下游基因NQO1、HO-1等在順鉑耐藥細胞中同樣高表達，RNA干擾下調Nrf2表達，可抑制下游基因表達，同時，耐藥細胞對順鉑的敏感性顯著增加。有趣的是，我們發現，抑制Nrf2蛋白水平，不僅抑制了Nrf2-Keap1信號通路相關分子的表達， 而且一系列自噬基因的mRNA水平、蛋白水平均受到抑制，自噬小體形成明顯減少，提示Nrf2-Keap1信號通路可能調節自噬活性、兩者協同作用參與了卵巢癌的順鉑耐藥。該結論與課題假說相符。通過比較分析穩定轉染了Nrf2的卵巢癌順鉑敏感細胞株、以及穩定轉染了 Nrf2 shRNA的卵巢癌順鉑耐藥細胞株的全基因組晶片結果，我們發現了一系列與卵巢癌順鉑耐藥相關的新的Nrf2下游基因，以膜轉運蛋白ABCF2分子為例，我們的初步研究表明，ABCF2作為全新的Nrf2的下游基因，可能被Nrf2激活，參與卵巢癌順鉑耐藥。通過本課題的研究，進一步豐富了卵巢癌的順鉑耐藥機制，深入揭示了Nrf2-Keap1信號通路在卵巢癌鉑類耐藥中的作用，創新性分析了Nrf2與自噬之間的分子串話，並發現了一系列新的Nrf2下游基因，其中以ABCF2為代表通過了初步驗證，證實了其在卵巢癌鉑類耐藥中的可能作用，為卵巢癌化療提供了潛在的新靶點。相信隨著後續課題的持續研究，將有更多功能基因被發現，為揭示卵巢癌順鉑耐藥機製做出更多貢獻。
