《TRAIL-CTP融合長效蛋白的表達篩選及生物活性分析》是依託四川大學，由朱洪擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：TRAIL-CTP融合長效蛋白的表達篩選及生物活性分析
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：朱洪
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
TRAIL能誘導多種腫瘤細胞凋亡，具有較好的有效性和安全性，是理想的抗腫瘤分子靶向生物靶點。但TRAIL易被腎小球清除，體內半衰期短，延長TRAIL生物半衰期能增強其治療效能。CTP融合蛋白是近年興起的一種新型蛋白長效化技術，CTP為內源性富含糖基化序列，該片段不增加蛋白質抗原性、不影響受體親和力及蛋白生物活性，已成功用於長效蛋白開發。本項目擬構建TRAIL與CTP不同拷貝基因連線的融合蛋白真核表達載體，以期改善TRAIL藥代動力學特性，實現TRAIL蛋白的長效表達，延長TRAIL在體內的半衰期，增強TRAIL的抗腫瘤療效。本項目通過對真核表達載體加壓篩選得到高表達細胞株，蛋白質純化得到高純度蛋白，在荷瘤小鼠模型和體外腫瘤細胞株中觀察TRAIL-CTP融合蛋白抗腫瘤生物活性，通過藥代動力學實驗檢測該融合蛋白半衰期，探索一種實現TRAIL蛋白長效化的可靠手段。
結題摘要
TRAIL 誘導腫瘤細胞凋亡，是理想的抗腫瘤靶點。TRAIL 單用療效不佳，腫瘤廣泛耐藥，半衰期短，作用不持續。本研究對（1）TRAIL＋CTP融合蛋白表達載體的構建、表達和篩選；（2）TRAIL＋CPP融合蛋白的設計與構建表達；（3）TRAIL穿膜肽樣突變體的設計與構建表達；（4）TRAIL穿膜肽樣突變體的規模化製備；（5）TRAIL穿膜肽樣突變體體內外生物活性篩選和研究，獲得了數種TRAIL-CPP融合蛋白和TRAIL穿膜肽樣突變體。經活性篩選，證明了（1）TRAIL-CPP融合蛋白、TRAIL穿膜肽樣突變體與野生型TRAIL蛋白相比，具有更強的抗腫瘤作用，對於野生型TRAIL耐藥的腫瘤細胞能夠逆轉藥物耐受，藥物敏感率接近80%，高於野生型TRAIL蛋白（50%）。（2）採用人肺癌NCI-H460細胞裸鼠皮下移植瘤模型，研究TRAIL-Mu3的抗腫瘤作用。結果顯示，所有不同給藥方案TRAIL-Mu3治療組抗腫瘤作用大大優越於陽性藥。TRAIL-Mu3每日給藥方案T/C值為33.50%（P＜0.01）；TRAIL-Mu3隔日一次方案T/C值為17.63%（P＜0.001）；TRAIL-Mu3每周給藥三次方案T/C值為16.75%（P＜0.001）。TRAIL-Mu3隔日給藥與每周給藥三次給藥方案療效相當，優越於每日給藥方案。TRAIL-Mu3持續抑制腫瘤的生長，療效大幅度提升的同時實現了藥物的長效化。項目首創了TRAIL穿膜肽樣突變體全新蛋白突變形式，獲得了數種優越的新型穿膜肽樣突變體。與野生型相比，體外生物活性更強，敏感率更高。TRAIL-Mu3的單次給藥劑量＞1500mg/kg動物安全。藥物穩定，成藥性好，套用前景廣闊。項目解決了國際上TRAIL類蛋白二十年研究中的重大缺陷，通過改進的給藥方案，TRAIL-Mu3在體內抗腫瘤作用上實現了長效化。項目首創了根據藥物作用衰減的半衰期（而不是藥物代謝半衰期）設定用藥間隔，並取得初步成功，進一步完善、補充和豐富目前有關藥物代謝與給藥間隔的理論，具有極大的理論和套用價值。
