TP53基因調控的microRNAs用於鼻咽癌基因治療和預後預測

《TP53基因調控的microRNAs用於鼻咽癌基因治療和預後預測》是依託中南大學，由熊煒擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：TP53基因調控的microRNAs用於鼻咽癌基因治療和預後預測
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：熊煒
• 依託單位：中南大學

項目摘要

本項目是申請者國內多年鼻咽癌分子生物學研究基礎和美國博士後研究期間TP53基因調控miRNAs課題的承接和延續。擬通過鼻咽癌細胞模型確定鼻咽癌中參與TP53基因調控網路且能誘導鼻咽癌細胞凋亡的主要miRNAs分子，明晰它們與TP53基因及其相關信號通路的調控機制；並通過本研究室自主研發的生物納米基因轉運體攜帶這些miRNAs在動物模型中進行鼻咽癌基因治療的前期實驗研究；同時利用本研究室組織微陣列技術平台在大樣本臨床標本中驗證這些miRNAs與鼻咽癌病人預後的關係，建立基於miRNAs的鼻咽癌預後預測模型。本項目的實施，在理論研究方面，將從miRNAs這個全新的角度對TP53基因及其調控網路在鼻咽癌發病過程中的機制有更深入的了解和認識；在臨床套用方面，篩選出的miRNAs可望用於鼻咽癌的基因治療及鼻咽癌分子分型和預後判斷等，為臨床醫生提供新的治療方案，從而提高鼻咽癌患者的生存時間和質量。

結題摘要

本項目首先在鼻咽癌HNE2細胞系中過表達TP53，並在轉染後0 h、12 h、24 h和48 h收集樣本，進行mRNA、miRNA和lncRNA晶片雜交。 晶片篩選出TP53相關差異表達的mRNAs主要參與：Cell cycle、p53 signaling pathway、Pyrimidine metabolism、DNA replication等。將差異表達的mRNAs與GSEA的p53靶基因進行比對，並將p53過表達的HNE2中差異表達的mRNA和lnRNA與鼻咽癌組織中差異表達的mRNAs和lnRNA數據（GSE61218）對比發現。將表達顯著差異的miRNAs和mRNAs上傳到Ingenuity Pathways Analysis (IPA)並構建鼻咽癌細胞中的miRNAs-mRNAs-lncRNAs共表達相互作用網路。 挑選其中lncRNA LOC401317進一步深入研究，發現LOC401317啟動子區域進行螢光素酶活性分析發現p53能明顯誘導包含野生型p53結合位點序列的螢光素酶活性，表明p53 通過與LOC401317轉錄起始位點上游p53結合位點結合，直接調控LOC401317的表達。MTT實驗發現LOC401317能明顯抑制細胞增殖。流式細胞檢測顯示LOC401317過表達的細胞阻滯在G0/G1期，並促進細胞凋亡。LOC401317上調p21，下調Cyclin D1和 Cyclin E1的表達；誘導PARP和Caspase-3的裂解。裸鼠成瘤顯示LOC401317 明顯抑制腫瘤生長，促進p21、Caspase-3表達上調，而Cyclin D1和Cyclin E1表達下調。 本課題在鼻咽癌細胞系HNE2中過表達TP53基因，通過miRNA和lncRNA晶片檢測，篩選出一些受TP53基因調控的miRNAs、mRNAs和 lncRNAs 分子，這些分子形成複雜的miRNAs-mRNAs調控網路，參與細胞周期進程、DNA損傷修復等。本課題還對LOC401317進行初步研究。發現LOC401317受到p53的直接轉錄調控，通過促進細胞周期G1/S期阻滯和誘導細胞凋亡，抑制鼻咽癌細胞HNE2的增殖。LOC401317可能成為鼻咽癌基因治療潛在的新靶點，為鼻咽癌的治療提供了一條新的途徑。