《TNF-a通過HuR上調TRAF1表達的機制及作用研究》是依託華中科技大學，由楊林擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：TNF-a通過HuR上調TRAF1表達的機制及作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：楊林
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
慢性淋巴細胞白血病（CLL）中，凋亡基因異常造成大量不成熟的B細胞堆積。文獻報導，活化核轉錄因子（NF-κB）的非經典途徑能使B淋巴細胞發育異常並抗凋亡。我們前期研究發現，TNF-α跨膜段作為受體介導NF-κB的非經典途徑活化，而分泌型TNF-α能顯著上調該受體在胞內的接頭分子TRAF-1，但具體調節機制仍不清楚。本課題擬通過雷射共聚焦、pull down及免疫共沉澱研究TNF-α能否誘導HuR蛋白核轉位，在翻譯水平上調TRAF1，並通過EMSA和polysomal profiling技術探討TRAF1在翻譯水平的調節是通過延長mRNA半衰期或啟動了非Cap依賴性途徑。最後，抑制HuR轉位，阻斷其對TRAF-1在翻譯水平的上調，通過western blotting、細胞毒實驗觀察TRAF-1對NF-κB非經典途徑的影響。以期為慢性淋巴細胞白血病的免疫治療提供新思路。
結題摘要
結題 慢性淋巴細胞白血病（CLL）中，由於凋亡基因異常造成大量不成熟的B細胞堆積。文獻報導，活化核轉錄因子（NF-κB）的非經典途徑能使B淋巴細胞發育異常並抗凋亡。我們前期研究發現，TNF-α跨膜段作為受體介導NF-κB的非經典途徑活化，而分泌型TNF-α能顯著上調該受體在胞內的接頭分子TRAF-1，但具體調節機制仍不清楚。本課題中，基於前期實驗結果和文獻，我收集了臨床CLL患者血液樣本，證實CLL患者的B細胞中NF-κB非經典途徑被活化。同時證明TNF-α刺激可有效激活NF-κB非經典途徑並在轉錄或者翻譯水平上調TRAF-1。具體的調節機制為TNF-α刺激細胞的HuR蛋白核轉位後，HuR蛋白在胞漿中與TRAF-1的mRNA結合後延長其半衰期，從而上調TRAF-1後活化NF-κB非經典途徑。最後，抑制細胞中的HuR核轉位後，TNF-α不能上調TRAF-1的表達，並且TNF-α誘導細胞發生凋亡能力增強。本研究闡明了內源性TNF-α上調TRAF1表達的機制，以及TRAF1上調後對NF-κB非經典途徑的活化的影響。並且，以HuR為靶點，阻斷上調TRAF1表達，進而阻斷內源性TNF-α對NF-κB非經典途徑的活化，使TNF-α轉向啟動DISC形成，腫瘤細胞發生凋亡增加。本研究為慢性淋巴細胞白血病的治療提供了新的分子靶點和線索。
