《SpvC特異性電化學型雙層殼聚糖納米金免疫感測器的研究》是依託天津商業大學，由龐廣昌擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：SpvC特異性電化學型雙層殼聚糖納米金免疫感測器的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：龐廣昌
- 依託單位：天津商業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本項目擬在已經建立的納米金-硫堇-殼聚糖吸附辣根過氧化物酶電化學生物感測放大系統的基礎上，通過納米金溶膠吸附抗蘇氨酸磷酸裂合酶Balb/c小鼠單克隆抗體，利用光譜掃描、原子力顯微鏡、生物薄膜干涉、循環伏安及交流阻抗法表征其吸附和組裝的各階段，研製出電化學型納米金雙膜免疫感測電極。與此同時，將該電極用於SpvC的定量測定，建立各種參數，為進一步運用該感測器篩選治療由志賀氏、沙門氏菌等OspF家族三型分泌系統效應蛋白所引起的疾病的藥物和致病機理提供特異性、高敏感、定量檢測方法；在此基礎上建立分別和同時測定分泌SpvC的志賀氏和沙門氏菌的各項參數，從而研製出檢測這兩種主要食源性致病菌的高靈敏、特異性納米金雙膜電化學型免疫感測器；進一步最佳化其參數和工藝，提高測定靈敏度、穩定性、重複性、半衰期和再生性能，為相關儀器設備、電極的研製和商業化奠定基礎。
結題摘要
本研究首先分離並純化了沙門氏菌蘇氨酸磷酸裂合酶（phosphothreonine lyase, SpvC），並以此為抗原製備單克隆抗體，獲得了5個單克隆抗體細胞株。藉助於生物分子相互作用儀（Octet® biolayer interferometry）從這5株抗SpvC單克隆抗體中篩選出與SpvC親和力最強的1個單克隆抗體細胞株¬¬。採用以納米金-硫堇-殼聚糖吸附辣根過氧化物酶為生物感測的信號放大系統，通過納米金溶膠吸附抗SpvC Balb/c小鼠單克隆抗體，利用紫外光譜掃描、透射電鏡表征納米金，原子力顯微鏡、循環伏安及交流阻抗法表征其吸附和組裝的各階段，成功研製出電化學型納米金雙層膜免疫感測電極。利用電流-時間曲線法分別測定PBS稀釋的沙門氏菌和志賀氏菌懸液，結果表明回響電流與兩種菌在10~1.0×104 cfu/mL範圍內線性相關，最低檢測限為5cfu/mL，線性方程分別為：△I=0.2103C+0.0256 (R2=0.9943)，△I=0.2044C+0.0263 (R2=0.9904)，由方程斜率表明：抗體與沙門氏菌有更好地親和力，這可能起因於SpvC來源於沙門氏菌。再利用時間電流曲線法測定PBS稀釋的兩種菌混合液，線性方程為：△I=0.2078C+0.026 (R2=0.9913)，表明該感測器可以檢測這兩種混合菌液中菌的總濃度。對其壽命、穩定性、重現性及選擇性進行了研究，結果證實：該感測器具有一定的使用價值，為進一步用於食品安全檢測奠定了基礎。在此基礎上，本項目進一步探討了將該信號放大系統用於受體胞外結構域和配體識別後所導致的胞內信號放大和傳導作用，取得了突破進展，在辣味（辣椒素、姜辣素）、甜味（阿斯巴甜、索馬甜）、鮮味（味素、鳥苷酸）和苦味（蔗糖八乙酸酯、苯甲地鈉胺、斛皮素）受體感測與動力學測定方面取得一批較有水平的研究成果。該項目為我們進一步進行受體感測器研究與套用奠定了堅實基礎。
