Southern-blot

Southern blot 是一種常用的 DNA 定量方法。

基本介紹

• 中文名：Southern-blot
• 屬於：分子生物學方法
• 套用於：檢測外源基因拷貝數
• 無法檢測：外源基因在插入時發生基因重組

Southern blot 是一種常用的 DNA 定量的。其原理是將待測的 DNA 樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標記的核酸探針進行雜交，在與探針有同源序列的固相 DNA 的位置上顯示出雜交信號，通過檢測信號的有無、強弱可以對樣品定性、定量，從而計算出轉入的拷貝數。 Southern 法準確性高、特異性強，但存在費時費力的缺點。另外，由於 Southern 法檢測不經過靶片段的擴增（ PCR ），一般每個電泳通道需要 10-30 μ g 的 DNA ，在實際操作中就需要較大量的植物材料來提取 DNA ，而轉基因植物的愈傷組織在無菌條件下經過篩選、重新分化後一般都比較細弱，不宜大量取樣。如果，造成限制性酶切位點丟失， Southern 法也到。這些因素都制約了 Southern 法在 T 0 代轉基因植物中。