Sonic hedgehog信號通路促進卵巢癌轉移機制研究及靶向治療

《Sonic hedgehog信號通路促進卵巢癌轉移機制研究及靶向治療》是依託華中科技大學，由奚玲擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Sonic hedgehog信號通路促進卵巢癌轉移機制研究及靶向治療
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：奚玲
• 依託單位：華中科技大學

中文摘要

轉移是卵巢癌患者最主要死因，對於其分子機制的深入研究才能為阻斷卵巢癌轉移提供新的靶標。由於腫瘤轉移與胚胎髮育的諸多相似性，調控胚胎髮育的hedgehog（Hh）信號通路在腫瘤轉移中的作用日漸受到重視。我們前期工作中檢測到卵巢癌妹市細胞株和組織中均有Hh信號通路分子的表達，多項體內外實驗顯示Hh信號通路對小鼠角膜移植瘤周圍淋巴管和斑馬魚胚胎淋巴管生成均有促進作用。在此基礎上，本項目將採用Lentivirus表達載體將SHH和Gli-SiRNA分別轉戲欠囑戒染卵巢癌細胞中，驗證卵巢癌中Hh是否通過自分泌方式調控Gli1靶基因Snail的表達，進而調控EMT並促進轉移；同時還將利用LCM、卵巢癌細胞與淋巴內皮細胞共培養模型、裸鼠卵巢癌原位移植模型等，驗證Hh信號通路在卵巢癌中是求囑甩旬否通過旁分泌作用瘤周間質細胞，促進瘤周淋鴉擔盛巴管生成和淋巴道轉移，以及Hh信號通路抑制劑聯合卡鉑能否有效阻斷卵巢癌轉移。

結題摘要

Hedgehog（Hh） 信號通路在胚胎時期的細胞生長分化發揮重要作用。最近研究發現在人類多種腫瘤中Hh信號通路也起著至關重要的作用。卵巢癌細胞株和組織中均有Hh信號通路分子的表達，多項體內外實驗顯示Hh信號通路對小鼠角膜移植瘤周圍淋巴管和斑馬魚胚胎淋巴管生產均有促進作用。在此基礎上提出實驗假設一，卵巢癌細胞自分泌SHH，通過調控轉錄因子Snail 表達調控EMT，促進腫瘤侵襲轉移；實驗假設二，卵巢癌細胞通過SHH旁分泌方式，改變腫瘤微環境，促進卵巢癌腫瘤間質淋巴管生產和淋巴道轉移。本研究分為兩部分，我們套用Hh信號通路抑制劑環靶明Cyclopamine作用於卵巢癌細胞株後，免疫螢光、MTT、劃痕實驗、Transwell 小室檢測形態、增殖、遷移、侵襲能力；運用RT-PCR，Western Blot等方法檢測上皮間質化分子標誌E-鈣黏蛋白E-cadherin，波形蛋白Vimentin表達水平的改變。利用組織原代分離培養技術分離腫瘤相關成纖維細胞（CAF），SHH配體作用於CAF細胞後，免疫螢光、RT-PCR、Western Blot檢測CAF的Gli-1、PTCH和VEGF-C的表達。淋巴管內皮細胞三維體外成管實驗探究Hh信號通路在卵巢癌通過旁分泌作用腫瘤相關成纖維細胞，促進瘤周淋巴管生成和淋巴道轉移。我們發現在卵巢癌細胞株中Hh信號通路核轉錄因子Gli-1與元乃永上皮間質化因駝犁妹子在婚擊精卵巢癌細胞株的表達有相關性，Cyclopamine作用於卵巢癌細胞株後明顯抑制了卵巢癌細胞的增值遷移侵襲能力；腫瘤細胞旁分泌SHH作用於腫瘤相關成纖維細胞，促進CAF分泌VEGF-C，促進淋巴管內皮細胞的遷移成管。本項目明確了Hh信號通路促進卵巢癌轉移的分子機制，為將來Hh通路抑制劑在卵巢癌中得臨床實驗提供必需的實驗數據。