SLCO1B1與CYP2C9之間的相互作用機理及在個體化用藥中的套用

《SLCO1B1與CYP2C9之間的相互作用機理及在個體化用藥中的套用》是依託浙江大學，由周權擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：SLCO1B1與CYP2C9之間的相互作用機理及在個體化用藥中的套用
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：周權
• 項目類別：面上項目

項目摘要

綜合考慮代謝酶與轉運體基因多態性對個體化用藥十分重要。我們前期工作發現SLCO1B1和CYP2C9存在某種聯繫，而兩者的相互作用機理尚不清楚。本項目套用OATP1B1轉基因細胞研究一系列CYP2C9底物經OATP1B1轉運的性質，探究CYP2C9底物與OATP1B1相互作用方式和構效關係。建立OATP1B1-CYP2C9雙轉染細胞模型，探索CYP2C9底物經OATP1B1的轉運與經細胞內CYP2C9代謝的內在清除率之間的關係。開展人體試驗，揭示SLCO1B1基因多態性對CYP2C9活性影響以及CYP2C9基因多態性對OATP1B1活性影響。利用臨床肝臟樣本，研究CYP2C9、OATP1B1在基因多態性、mRNA和蛋白水平的相關性，以及相關核受體因子在CYP2C9和OATP1B1相互關係中的作用。揭示SLCO1B1與CYP2C9相互作用的分子機理，為指導個體化合理用藥提供科學依據。

結題摘要

SLCO1B1和CYP2C9可能存在某種聯繫，而兩者相互作用的研究國內外未見報導。本項目利用OATP1B1轉基因細胞研究系列CYP2C9底物經OATP1B1轉運，探究CYP2C9底物與OATP1B1相互作用方式和定量關係。通過RT-PCR、Western blotting和瑞舒伐他汀在單克隆細胞中的積聚試驗，篩選出功能穩定、表達量高的人OATP1B1*1a/*15細胞株。證實HEK293-OATP1B1*1a細胞對托拉塞米的攝取呈現出良好的時間依賴性，細胞內積聚符合米氏方程特徵。運用穩定表達OATP1B1 的HEK293細胞，通過OATP1B1經典底物瑞舒伐他汀的攝取實驗，對33種中藥化學成分中人OATP1B1潛在抑制劑進行了篩選。首次發現苦玄參苷等17種對瑞舒伐他汀的攝取均有抑制作用，而白藜蘆醇等8種能顯著增加細胞中瑞舒伐他汀的攝取。建立OATP1B1-CYP2C9雙轉染細胞模型，探索CYP2C9底物經OATP1B1的轉運與經細胞內CYP2C9代謝的內在清除率之間的關係。通過人CYP2C9表達質粒的構建、細胞轉染、專屬底物驗證單克隆細胞 CYP2C9 功能，證實與不轉染CYP2C9的細胞相比，單克隆細胞有顯著功能。對托拉塞米在HEK293-OATP1B1*1a-CYP2C9單克隆細胞中的攝取與代謝進行考察。以HEK293-MOCK-CYP2C9和HEK293-OATP1B1*1a-CYP2C9細胞模型考察33種中藥化學成分對托拉塞米攝取和代謝的作用，研究OATP1B1和CYP2C9在肝臟藥物處置中的共同作用。證實HEK293-OATP1B1-CYP2C9細胞中環孢素作用後托拉塞米代謝下降是由於攝取被顯著抑制所致。發現一些中藥單體能同時抑制OATP1B1和CYP2C9從而導致托拉塞米的攝取與代謝量均下降；一些中藥單體是OATP1B1的底物和CYP2C9的抑制劑，通過OATP1B1攝取進入細胞從而抑制CYP2C9代謝托拉塞米。證實熊去氧膽酸、鵝去氧膽酸和牛黃膽酸鈉抑制托拉塞米代謝和OATP1B1攝取，牛黃膽酸鈉通過OATP1B1攝取進入細胞從而抑制CYP2C9對托拉塞米代謝。CYP2C9*3對OATP1B1底物匹伐他汀PK有重要影響，但SLCO1B1多態性對CYP2C9底物氟伐他汀PK無顯著影響。循證發現轉運體與藥物代謝酶之間相互作用在評價DDI臨床數據時應予以強調。