《SKA1基因在骨肉瘤原發耐藥中的作用機制研究》是依託上海交通大學，由沈贊擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：SKA1基因在骨肉瘤原發耐藥中的作用機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：沈贊
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
骨肉瘤的惡性程度高，預後差。化療原發耐藥阻礙其療效提高，由於缺乏合適的研究模型，原發耐藥相關研究進展甚微。.我們對19例新鮮活檢標本原代培養並傳代成株，發現了具備原發耐藥特性的SF-86和化療敏感的NC-04細胞株，並建立了原發耐藥骨肉瘤裸鼠模型（專利號：201010110746X）。.通過對SF-86和NC-04細胞進行全基因組表達譜基因晶片對照分析，初步篩選出50個潛在的原發耐藥相關分子，隨後建立shRNA慢病毒RNAi文庫進行功能驗證，發現SKA1基因顯著影響SF-86細胞對多種化療藥物的耐藥功能，提示SKA1基因在骨肉瘤原發耐藥中起重要作用，而目前未見相關報導。.本項目擬深入研究SKA1基因抑制後下游基因轉錄、通路蛋白表達的改變，明確SKA1顯著調控的信號通路與下游靶分子，利用GST pulldown技術聯合質譜鑑定SKA1相互作用的蛋白，從而闡明其發揮耐藥功能的分子機制。
結題摘要
骨肉瘤的惡性程度高，預後差。化療原發耐藥阻礙其療效提高，由於缺乏合適的研究模型，原發耐藥相關研究進展甚微。 我們對19例新鮮活檢標本原代培養並傳代成株，發現了具備原發耐藥特性的SF-86和化療敏感的NC-04細胞株，並建立了原發耐藥骨肉瘤裸鼠模型（專利號：201010110746X）。 通過對SF-86和NC-04細胞進行全基因組表達譜基因晶片對照分析，初步篩選出50個潛在的原發耐藥相關分子，隨後建立shRNA慢病毒RNAi文庫進行功能驗證，發現SKA1基因顯著影響SF-86細胞對多種化療藥物的耐藥功能，提示SKA1基因在骨肉瘤原發耐藥中起重要作用，而目前未見相關報導。 本項目觀察了SKA1基因穩定沉默的SF-86，U2OS和Saos-2細胞株的耐藥變化，發現SKA1基因穩定沉默後，SF-86細胞的耐藥性明顯消失，恢復了對MTX，DDP和ADM的敏感性，而U2OS及Saos-2的藥物敏感性也有一定的增加。同時，SKA1基因穩定沉默後，SF-86，U2OS及Saos-2細胞株的增殖和侵襲力都顯著降低。酵母雙雜交實驗發現SKA1基因能夠和轉錄複合體II的亞單位RPB3結合。隨後我們進行了免疫共沉澱實驗進一步驗證，發現在SF-86細胞中，SKA1基因確實能夠和轉錄複合體II的亞單位RPB3發生內源性結合。我們再用染色體免疫共沉澱（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）的方法，深入研究SKA1、RPB3和FBGS基因之間的關係。發現，MTX治療時，RPB3蛋白能夠結合到FPGS基因的啟動子區域，而高表達SKA1基因時這種結合被抑制；而SKA1蛋白本身並不能結合到FPGS基因的啟動子區域，這說明，MTX的原發耐藥機制在於，SKA1基因高表達時，抑制了RPB3和FPGS基因的啟動子區域的結合，從而抑制了MTX作用於細胞時，細胞應該啟動的FPGS表達增加，因此不能合成能夠滯留在細胞內的MTXPG，細胞內的MTX濃度無法達到有效地殺傷濃度水平。至此，本項目基本闡明SKA1基因在MTX原發耐藥中的作用及其分子機制。
