《SIRT1/SRY乙醯化途徑調控PCOS患者IL18表達的作用機制研究》是依託北京大學，由楊艷擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：SIRT1/SRY乙醯化途徑調控PCOS患者IL18表達的作用機制研究
- 項目負責人：楊艷
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
多囊卵巢綜合徵(PCOS)是育齡期婦女不孕的重要病因。前期通過基因微陣列芯技術、血清ELISA檢測、生物信息技術等發現IL18為PCOS患者與非PCOS對照組差異最顯著的炎症因子；SIRT1/SRY乙醯化途徑可能參與調控PCOS卵巢顆粒細胞IL18表達，但具體機制尚不清楚。本課題擬用免疫組化、Western-blot等探討IL18、SRY和SIRT1基因在PCOS患者及非PCOS對照組卵巢石蠟標本及新鮮卵巢顆粒細胞中的表達；通過雙螢光素酶、凝膠遷移電泳（EMSA）、電離質譜、胺基酸定點突變、乙醯化水平鑑定等探索SIRT1通過去乙醯化調節SRY轉錄活性影響PCOS顆粒細胞IL18表達的分子機制；最後通過構建DHEA誘導的PCOS動物模型在體內明確SIRT1/SRY信號通路調節IL18表達的作用機制。SIRT1/SRY/IL18信號通路的研究可能有助深入闡明PCOS的發病機制及候選治療靶點。
結題摘要
我們已知多囊卵巢綜合徵（PCOS）是一種臨床高度異質性，病因複雜的疾病，其發病機制仍不清楚。近年來，有學者提出PCOS患者體記憶體在慢性低度炎症反應，因此慢性炎症及其相關的氧化應激可能對PCOS的發生髮展以及其遠期風險有重要的意義。在之前的研究中，我們發現PCOS患者血清中炎症因子IL-18明顯升高，但其在子宮內膜中的表達及調控研究尚少。 為探討PCOS患者子宮內膜中炎症因子IL-18的表達情況及其臨床意義。驗證IL-18的上游調控因子SIRT1以及C/EBP-β對子宮內膜中IL-18的調控作用。我們利用免疫組化法對PCOS患者及對照組增殖期子宮內膜IL-18的表達進行定位。利用實時定量PCR以及Western Blot方法分別對PCOS和對照組子宮內膜中IL-18的基因和蛋白進行檢測。利用CO-IP和雙螢光素酶實驗驗證SIRT1與C/EBP-β，以及C/EBP-β與IL-18的相互作用關係。並對子宮內膜細胞體外分離培養，利用病毒轉染過表達SIRT1，檢測C/EBP-β及IL-18 表達的變化。C/EBP-β與IL-18的相互作用。對增殖期子宮內膜上皮和基質細胞進行體外分離培養，利用慢病毒轉染過表達SIRT1，發現 C/EBP-β與IL-18蛋白表達均明顯升高。研究發現PCOS患者增殖期子宮內膜中，IL-18基因和蛋白的水平較對照組明顯升高。利用免疫共沉澱實驗證實了SIRT1和C/EBP-β的結合，利用雙螢光素酶實驗證實C/EBP-β與IL-18的相互作用。對增殖期子宮內膜上皮和基質細胞進行體外分離培養，利用慢病毒轉染過表達SIRT1，發現 C/EBP-β與IL-18蛋白表達均明顯升高。通過本研究，我們發現炎症因子IL-18在PCOS患者增殖期子宮內膜中的表達升高。而去乙醯化酶SIRT1可以激活轉錄因子C/EBP-β，從而促進子宮內膜細胞IL-18的表達，並驗證了SIRT1/C/EBP-β/IL-18信號通路。為進一步闡明PCOS患者炎症因子高表達的原因提供了理論依據，並間接提示PCOS患者子宮內膜容受性下降與炎症相關。
