《RANK信號通路中RANK與RYBP相互作用的結構與功能研究》是依託清華大學，由王新泉擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：RANK信號通路中RANK與RYBP相互作用的結構與功能研究
- 依託單位：清華大學
- 項目負責人：王新泉
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
人體的骨骼隨著機械應力和激素水平等的變化處於骨吸收和骨重建的動態平衡過程，一旦該平衡被破壞，就會造成骨質疏鬆、骨硬化、關節炎、糖皮質激素誘導的骨丟失和多發性骨髓瘤等多種疾病。RANKL/RANK/OPG系統對於骨吸收和骨重建起著中心調控作用，是預防和治療包括骨質疏鬆在內的骨溶解疾病的理想靶點。我們將研究RANKL/RANK/OPG系統在細胞內的信號傳導機制，研究目標為RANK受體胞內結構域通過其IVVY基序與下游接頭蛋白RYBP的相互作用。我們將利用結構生物學、生物化學和細胞生物學方法，解析RANK與RYBP複合物的結構，並研究鑑定RANK 信號通路中與RYBP相互作用的下游信號分子，從而揭示RANK與RYBP作用的結構基礎與分子機制，進一步闡釋該信號通路傳導的細節。研究成果將為破骨細胞的生理和病理研究提供更堅實的基礎，也將為特異性靶向破骨細胞生成的藥物設計提供直接的結構信息。
結題摘要
人體的骨骼隨著機械應力和激素水平等的變化處於骨吸收和骨重建的動態平衡過程，一旦該平衡被破壞，就會造成骨質疏鬆、骨硬化、關節炎、糖皮質激素誘導的骨丟失和多發性骨髓瘤等多種疾病。 RANKL/RANK/OPG 系統對於骨吸收和骨重建起著中心調控作用，是預防和治療包括骨質疏鬆在內的骨溶解疾病的理想靶點。該系統在胞內的信號傳導機制則有很多關鍵問題尚待解決，研究表明受體RANK可能招募除TRAF以外的蛋白傳遞信號，經過文獻調研我們發現RYBP與RANK結合的可能性最大。因而本課題中，我們的研究目標包括解析RANK與RYBP複合物的結構，剖析RANK與RYBP作用的分子機制並鑑定與RYBP有相互作用的下游信號分子。 在本項目執行的前兩年我們主要圍繞相互作用核心區域RANK（510-558）以及RYBP（144-180）的表達純化進行了一系列的研究，嘗試了細菌、昆蟲細胞和哺乳動物細胞三種表達系統，但未獲得較好狀態的蛋白，能夠進行下一步結構測定工作；項目執行的第三年我們主要圍繞相互作用核心區域，嘗試在大腸桿菌周質空間的表達和RANK胞內全長與RYBP全長的表達，嘗試了多種方法後依然拿不到狀態較好的蛋白；項目執行的第四年我們嘗試密碼子最佳化，限制性蛋白酶解，N端測序等方法以期獲得狀態良好的蛋白。但目的蛋白依然呈現高聚，易降解等狀態。本項目經費共支持發表研究論文5篇，支持培養研究生4名（碩士生1名，博士生3名）。
