技術回顧QuantiMAT技術的前身是分支鏈 DNA 信號放大技術 ，是一種不依賴PCR擴增的核酸雜交信號放大檢測技術。QuantiMAT是技術升級版，最佳化了第一代技術中心的缺陷和不足。該技術克服了傳統的real time PCR技術中的缺陷與不確定因素，無需抽提純化RNA，無需反轉錄，無需PCR擴增，只要將樣本用特定裂解液裂解後， 經探針雜交與信號放大後即可迅速得到基因定量結果。
基本介紹
- 中文名：核酸分子精確定量信號放大技術
- 外文名：Quantitative Molecular Amplification Technique
- 技術領域：核酸分子檢測技術
- 發明領域：核酸精確定量檢測技術
QuantiMAT技術具有高靈敏度、檢測範圍大和準確定量等優點，對各種普通樣本和qPCR很難分析的血液樣本與保存多年後mRNA高度降解的甲醛固定石蠟包埋的FFPE樣本同樣具有極高的準確度與重現性。
相比較而言，模板擴增技術有如下缺點：
1、無論Taq酶還是逆轉錄AMV酶都沒有3‘→5‘核算外切酶活性，容易發生鹼基錯配，Taq酶的錯配頻率在1/9000左右，AMV逆轉錄酶在高dNTP和Mn2+存在時，大約每500個鹼基出現一個錯配。
2、引物3‘端部分鹼基配對可能導致非特異性擴增，出現引物二聚。
3、外源性污染容易導致假陽性。
4、凡是影響核酸擴增的任何因素均可影響檢測結果，由於影響因素較多，因此反應的重複性較差。
技術特點介紹：
- 首先裂解樣本，釋放出目標RNA；
- 然後加入探針組，捕獲延伸探針的一部分與孔板底部的通用探針結合， 另一部分與目標RNA結合。“K ”型標記延伸探針與目標RNA 結合。 還有一個封閉探針用來封閉一些位點提高特異性。
- 探針組雜交後，逐步加入信號放大前體、放大體、鹼性磷酸酶標記的探針和底物。一組 “K”可將信號放大400倍，一般一個目標 RNA 會結合20組 “K”，所以一個RNA 目標會被放大8000倍。最後用化學發光分析儀檢測。
- 定量檢測可以得到實際的倍數差異,而不是CT的變化結果更直接準確。
- 靈敏度比TaqMan高100~1000倍。
