Pyrosequencing技術是 Ronaghi 等提出一種序列分析新策略與末端終止法的思路恰好相反，“序列分析是依靠合成”(sequen-cing-by-synthesis) 而非終止合成。其方法是單鏈DNA 模板被合成互補鏈，4 種dNTP 按與模板鹼基互補的原則依次有序地結合到模板上，每當一個dNTP 成功地加到模板時會釋放出焦磷酸(pyrophosphate,ppi),其釋放數量與結合進人DNA 的dNTP 數量相一致。此刻，PPI 被硫醯酶(Sulfurylase) 催化形成ATP，ATP 促進了螢光素酶(Lucif-erase)氧化螢光素(oxyluiferin) 通過這些酶促反應能實時發射出螢光被CCD照相技術記錄下來。
Pyrosequencing 技術確實具快速、省力的優點，但測序長度一般在100 個核苷酸左右，所以自Ronaghi (2001) 發表於GenomeRes 以來常用於短序列分析，如CPG 島的甲基化研究，SNP分析等，直至近一兩年一些研究者將此技術與微流(microfluidics) 技術結合不僅已用於基因組全序列分析，而且已成為新一代DNA序列分析技術的重要基礎。
