PcG蛋白PHF1在肺癌p53突變體調控中的機制研究

《PcG蛋白PHF1在肺癌p53突變體調控中的機制研究》是依託昆明理工大學，由楊洋擔任項目負責人的地區科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：PcG蛋白PHF1在肺癌p53突變體調控中的機制研究
• 項目類別：地區科學基金項目
• 項目負責人：楊洋
• 依託單位：昆明理工大學

項目摘要

雲南省的肺癌發病率和死亡率是全國平均水平的兩倍。肺癌的發生髮展機制研究和新的藥物靶標的發現，是雲南地區癌症研究的重要課題。腫瘤抑制因子p53在大約50%的腫瘤中是突變的。突變的p53可能不僅喪失了正常的腫瘤抑制功能，甚至促進腫瘤的惡化。我們前期的研究發現，聚疏蛋白PHF1在腫瘤細胞中通過保護野生型p53蛋白的穩定而特異性激活p53通路，最終實現腫瘤抑制效果。但對於p53突變體，PHF1不能激活p53 R342X，卻仍然保留了對p53 R248W的部分激活活性。因此我們推測，PHF1對不同p53突變體的調控作用不同。本課題將研究PHF1對肺癌中p53突變體的調控。檢測PHF1對其各自通路的影響、蛋白水平上的作用、生物學效應和在動物模型中的表現。以期更全面認識PHF1調控突變型p53在肺癌發生髮展過程中的機制，為進一步認識PcG蛋白的功能和開發以突變p53為靶標的肺癌防治策略提供有價值的線索。

結題摘要

我國肺癌發病率和死亡率位居癌症之首，其發生髮展機制研究和新的藥物靶標的發現，是腫瘤研究的關鍵問題。腫瘤抑制因子p53突變可能不僅喪失了正常的腫瘤抑制功能，還促進腫瘤發生髮展。本研究利用雙螢光素酶報告系統、co-IP、western blot、實時螢光定量PCR、CCK-8細胞活力檢測、流式細胞術等方法，檢測了PHF1對肺癌中不同p53突變體的不同調控作用，發現PHF1對p53 249突變體介導的通路幾乎不具有激活能力，而248突變體還保持較高的激活水平，其它突變體位於二者之間。同時， PHF1對158、249和273突變體的mRNA具有顯著抑制作用，而對248突變體的轉錄具有顯著增強作用。PHF1與p53突變體248和249互作能力強於野生型，敲減了PHF1後，p53野生型及突變體蛋白水平下調，其中157和249蛋白水平在敲減了PHF1後下調較其它樣品為弱。生物學效應方面，p53野生型和249突變都能提高過表達PHF1後凋亡誘導藥物Etopaside的能力，而248突變則與此相反，協助PHF1提高了凋亡誘導刺激下的腫瘤細胞存活率，因此，我們初步解釋了PHF1對p53不同突變體的調控及其生物學後果。另外，在肺腺癌和肺鱗癌病人組織樣本中，PHF1的表達水平都顯著高於正常組織。前期我們在乳腺癌的研究中發現，癌組織PHF1表達顯著下調，和肺癌結果相反，可能與癌腫分類以及其他調控因素有關。轉錄組鑑定肺癌中PHF1過表達可以上調160個、下調148個基因表達，PHF1敲減後可以上調47個，下調63個基因表達。利用CRISPR-Cas9技術在肺癌中敲除了PHF1，為後續深入研究打下堅實基礎。並為以PHF1調控p53及其突變體軸為中心，深入研究膜外信號通過PHF1到p53到細胞後果的調控網路提供了基礎數據和有價值的線索。 本研究在完成計畫的同時，為後續深入研究的開展奠定了基礎。本研究的核心內容發表了一篇中文核心期刊論文，正在整理投稿一篇SCI論文，完成一篇碩士論文研究。主要標註資助支持和參與發表SCI論文4篇，中文核心期刊論文4篇。