PTENP1作為ceRNA調控PTEN表達及介導肝癌EGFR抑制劑耐藥的機制研究

《PTENP1作為ceRNA調控PTEN表達及介導肝癌EGFR抑制劑耐藥的機制研究》是依託西安交通大學，由田濤擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：PTENP1作為ceRNA調控PTEN表達及介導肝癌EGFR抑制劑耐藥的機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：田濤
• 依託單位：西安交通大學

中文摘要

PTEN在腫瘤中的調控機制是目前的研究熱點。最新研究表明，PTEN的假基因PTENP1可以和PTEN競爭性結合miRNAs，調控PTEN/Akt信號通路。結合本課題組前期研究，PTEN拮抗Akt通路發揮抑制肝癌的效應，同時異常激活的Akt通路介導肝癌對EGFR抑制劑耐藥。因此我們推測，PTENP1通過競爭性結合miRNAs參與PTEN/Akt通路調控並介導肝癌EGFR抑制劑耐藥。本項目擬在肝癌標本中檢測PTENP1、PTEN及miRNAs的表達水平並分析相關性；在肝癌細胞及裸鼠模型中通過基因轉染、qPCR、免疫螢光、miRNA功能分析、報告基因實驗探討PTENP1作為ceRNA參與PTEN轉錄後調控的分子機制；在體內外實驗中觀察PTENP1對肝癌惡性生物學行為及PTEN/Akt信號通路的影響，進一步闡明這一新的調控機制在肝癌EGFR抑制劑耐藥中的作用，為肝癌治療提供新的理論基礎和實驗依據。

結題摘要

PTEN作為PI3K/Akt通路的重要抑癌基因，其表達缺失或下調是HCC發生和發展的重要分子事件。近年來，microRNA通過轉錄後調控引起靶基因表達缺失或豐度下調的作用模式受到越來越多的重視。本研究以與PTEN相關的miR——miR32和miR155作為研究對象，以PI3K/Akt信號通路為主軸，HCC發生髮展和耐藥的發生作為本研究的2個方向。在miR32引起HCC耐藥發生的研究中，首先檢測miR32在肝癌5-Fu耐藥細胞株中為高表達而PTEN為低表達；然後構建裸鼠皮下移植瘤模型並在模型和HCC臨床病理資料中檢測相關分子的表達，明確miR32和PTEN表達的相關性；利用雙螢光素酶報告基因實驗驗證miR32和PTEN的靶向性，再轉染miR32干預劑、PTEN小干擾RNA、過表達PTEN質粒，以及使用PI3K/Akt通路抑制劑WM，利用real-time PCR和western blot驗證miR32和PTEN的關係；隨後通過MTT從功能方面證實miR32靶向PTEN引起HCC耐藥發生；最後從PTEN下游分子出發探討了miR32-PTEN-PI3K/Akt通過EMT作用誘導HCC耐藥發生。在miR155促進HCC發生髮展的研究中，首先利用real-time PCR在DEN-誘導大鼠HCC模型、HCC臨床病理資料和HCC細胞中檢測miR155和PTEN和的表達極其相關性；利用雙螢光素酶報告基因實驗驗證miR155和PTEN的靶向性，再通過轉染miR155干預劑、PTEN小干擾RNA、過表達PTEN質粒以及使用WM，利用real-time PCR和western blot間接印證miR155和PTEN的關係；接著驗證miR155通過靶向PTEN異常激活PI3K/Akt通路促進HCC細胞增殖、侵襲和遷移，並抑制凋亡；通過western blot檢測PTEN下游分子與凋亡和侵襲遷移相關分子的表達變化，確定miR155能促進HCC發生髮展。通過本研究我們得出結論：1、miR32通過靶向PTEN異常激活PI3K/Akt引起EMT作用，誘導HCC多藥耐耐藥的發生；2、miR155靶向PTEN導致PI3K/Akt通路過度激活，促進HCC發生髮展。我們闡明了PTEN相關miR在HCC發生髮展和耐藥發生中的重要作用及機制，為尋找HCC治療的新靶點提供理論依據。