《PPARγ在牙齦卟啉單胞菌引起內皮功能紊亂中的作用及機制》是依託北京大學，由李蓬擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：PPARγ在牙齦卟啉單胞菌引起內皮功能紊亂中的作用及機制
- 項目負責人：李蓬
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
牙周致病菌和內皮功能紊亂密切相關。牙齦卟啉單胞菌Pg侵入內皮細胞時，轉錄因子PPARγ的表達及其影響血管舒張物質NO合成的具體分子機制還不清楚，明確此機制，對防治牙周病和動脈粥樣硬化均具有重大意義。本研究擬通過建立Pg侵入人臍靜脈內皮細胞的模型，套用RT-PCR和Western blot 檢測PPARγmRNA和蛋白表達的改變，通過螢光素酶報告基因質粒檢測PPARγ轉錄活性變化；通過DCFA-AM螢光探針等技術檢測細胞活性氧簇（ROS）的改變，並分析PPARγ被配體激活或阻斷劑作用後細胞ROS水平的改變，進而對四氫生物蝶呤和NO合成量的影響；通過加入特異的阻斷劑和配體，探索PPARγ對PI3K/Akt/eNOS和MAPK/NF-κB /iNOS信號通路的影響，以期明確Pg導致內皮功能紊亂中PPARγ影響NO合成的具體分子機制，並為改善Pg所致內皮功能紊亂治療尋找新靶點。
結題摘要
牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis, P.gingivalis）侵入時，轉錄因子過氧化物酶體增生物激活受體（peroxisome proliferator-activated receptor, PPAR）γ的表達及其影響血管收縮物質一氧化氮合成的具體分子機制還不清楚，明確此機制，對防治牙周病和動脈粥樣硬化均具有重大意義。本研究成功建立P.gingivalis侵入人臍靜脈血管內皮細胞系EA.hy926的模型。套用realtime PCR檢測PPARγmRNA表達在Pg刺激後1小時後顯著升高，套用Western blot檢測PPARγ蛋白表達在Pg刺激後2小時顯著升高，通過螢光素酶報告基因質粒檢測PPARγ轉錄活性亦顯示在Pg刺激後PPARγ轉錄活性顯著增強，證實PPARγ參與了P.gingivalis刺激血管內皮細胞的過程。後續研究設計了四組，分別是對照組為EA.hy926加培養基，P.gingivalis刺激組為P.gingivalis W83刺激EA.hy926細胞，PPARγ激活組為提前30分鐘加入PPARγ的激動劑15d-PGJ2預處理後再用P.gingivalis 刺激細胞，PPARγ抑制組為提前30分鐘加入PPARγ的拮抗劑GW9662預處理後再用P.gingivalis 刺激細胞。研究結果顯示在P. gingivalis刺激組細胞內的活性氧水平和抗氧化應激的產物均顯著高於對照組。NO合成量在P.gingivalis刺激組4小時達到峰值，在PPARγ激活組P.gingivalis刺激8小時候達到峰值。Western blot檢測結果顯示P.gingivalis刺激時iNOS蛋白表達增加，eNOS蛋白表達下降，PPARγ通過PI3K/Akt通路增加p-eNOS表達從而增加NO產量。P.gingivalis刺激時， ERK蛋白表達顯著下降，PPARγ激活後ERK蛋白表達升高，提示PPARγ亦通過ERK通路影響NO產量。綜上PPARγ參與了Pg刺激血管內皮細胞過程，PPARγ激活可通過PI3K/Akt/eNOS及ERK通路影響NO合成，PPARγ配體有望改善P.gingivalis引起的內皮功能紊亂。
