PKCzeta與VASP相互作用調節細胞骨架和細胞運動的相關機制研究

《PKCzeta與VASP相互作用調節細胞骨架和細胞運動的相關機制研究》是依託天津醫科大學，由張曉方擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：PKCzeta與VASP相互作用調節細胞骨架和細胞運動的相關機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：張曉方
• 依託單位：天津醫科大學

中文摘要

在腫瘤轉移過程中趨化運動起著關鍵作用，申請人讀博期間所在課題組已發表文章表明PKCzeta是EGF誘導的乳腺癌細胞趨化運動信號通路中的關鍵信號分子，採用siRNA技術降低PKCzeta表達後，可以明顯抑制EGF誘導的趨化運動，細胞骨架肌動蛋白聚合能力明顯減弱。但目前關於趨化運動過程中PKCzeta調控的下游細胞骨架信號通路具體機制並不清楚，我們前期研究採用免疫共沉澱偶聯質譜分析的方法發現VASP是PKCzeta的一個結合蛋白，VASP在調節細胞骨架中發揮重要作用，本研究擬在前期工作基礎上進一步闡明VASP與PKCzeta的結合位點，明確PKCzeta對VASP及細胞骨架的調節作用，並明確VASP在EGF誘導的乳腺癌細胞趨化運動中的作用,進一步明確PKCzeta在調節細胞骨架和細胞運動中的作用，為篩選治療乳腺癌轉移提供新的評估指標和靶點，對完善乳腺癌轉移的治療提供重要線索。

結題摘要

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，腫瘤轉移的發生是導致患者治療失敗和死亡的主要原因。趨化運動(chemotaxis)是細胞遷移的形式之一，在乳腺癌的轉移過程中起著關鍵作用。PKCz（Protein Kinase C zeta, PKCzeta）是乳腺癌細胞趨化運動信號途徑中的關鍵分子，我們的前期一系列功能研究表明在EGF誘導的乳腺癌細胞趨化運動中，PKCz的活化受由上游的PDK1、Akt2、Rictor和C1QBP等分子調控。但是PKCz在趨化運動過程中調控下游信號通路及細胞骨架的詳細分子機制對於研究乳腺癌細胞的趨化運動和腫瘤轉移具有重要意義。套用質譜分析的方法，我們發現VASP是PKCz的一個結合蛋白質，用免疫共沉澱、Western Blot 的方法驗證了二者之間的相互作用。免疫螢光共聚焦顯微鏡分析顯示VASP與PKCz在細胞內有共定位，在EGF刺激後，二者在細胞膜上共定位增加。VASP降表達後乳腺癌細胞MDA-MB-231細胞的趨化運動和細胞遷移能力明顯減弱，F-actin聚合能力也減弱，但不影響細胞的增殖。PKCz可以通過與VASP相互作用並作為VASP的上游信號分子，調控VASP S157位點的磷酸化，進而影響VASP與Profilin的結合，從而調控肌動蛋白的聚合，影響細胞的運動能力。動物試驗表明VASP降表達後，在自發轉移和實驗轉移動物模型中，遠處轉移能力均弱於對照組。在乳腺癌的轉移過程中起到非常重要的作用，可能成為潛在的治療乳腺癌的分子靶標之一。