《PITX1對胃癌抑瘤作用分子途徑及其調控機制的研究》是依託東南大學，由趙主江擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：PITX1對胃癌抑瘤作用分子途徑及其調控機制的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：趙主江
- 依託單位：東南大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
Pitx1作為候選抑癌基因因其參與抑制Ras信號傳導通路激活而受關注。PITX1蛋白在多種腫瘤中表現為低表達模式，提示其參與腫瘤的發生髮展。我們及其他研究者研究均發現胃癌組織中Pitx1基因的低表達模式。我們近期研究亦發現Pitx1基因導入致胃癌細胞周期阻滯及細胞凋亡，明顯抑制了細胞增殖能力。這些結果提示Pitx1基因在胃癌抑瘤治療上具有套用潛力。本研究將在前期研究基礎上，從細胞模型到動物模型深入探討Pitx1基因對胃癌的抑瘤作用及效果，並分析PITX1作用所涉及的信號傳導通路；套用ChIP、ChIP-PCR-Seq.、酵母雙雜交等方法，揭示PITX1作為轉錄因子對腫瘤相關基因的表達調控，並初步探討Pitx1基因表達的表觀遺傳調控機制。PITX1在胃癌發生中涉及的信號傳導通路及調控方式的深入探討，將為闡明其抑癌作用途徑及其調控機制提供新的依據，為胃癌的發病機制闡明和治療提供一個新的觀點。
結題摘要
胃癌發生的遺傳因素主要有癌基因的激活和抑癌基因的失活等。近年來越來越多的研究表明PITX1的異常表達與多種腫瘤的發生有關，但PITX1在腫瘤發生中的作用及其調控機制並不清楚。本研究首先分析了PITX1在胃癌細胞中的生物學功能，發現PITX1過表達和沉默後能明顯抑制或促進胃癌細胞的增殖能力，究其原因主要為PITX1影響細胞周期G1/S期轉變和影響了caspase 3、9剪下體的表達，可能通過線粒體途徑參與胃癌細胞凋亡。 通過ChIP-seq技術系統的捕獲到PITX1結合的基因。生物信息學分析提示，PITX1結合基因參與細胞的各種各樣的生物學過程。本研究以TP73和PDCD5為候選者，進一步探討了PITX1如何通過結合下游基因的啟動子區影響基因的轉錄，參與胃癌細胞的凋亡。此外，為了探討PITX1的表達調控機制，本研究通過miRNA microarray/軟體預測獲得可能調控PITX1的候選miRNA，並通過螢光素酶活性分析實驗等初步證實PITX1可能受miR-19a-3p的調控。套用CCK-8法檢測過表達PITX1的胃癌細胞系AGS、BGC對化療藥物5-FU和順鉑（CDDP）的敏感性變化，以及PITX1敲低表達的胃癌細胞系MCG和7901對5-FU和順鉑（CDDP）的敏感性變化。分析CHIP-seq數據中PITX1可能調控的下游與化療耐藥相關的基因，挑選凋亡相關基因PDCD5做進一步分析，RT-qPCR檢測PITX1對PDCD5的轉錄調控。結果發現，過表達PITX1明顯增加了胃癌細胞AGS和BGC對5-FU與順鉑（CDDP）的敏感性，敲低PITX1則減弱了胃癌細胞MCG和7901對5-FU與順鉑（CDDP）的敏感性。CHIP-seq檢測到PITX1結合的區域參與細胞死亡和凋亡過程相關的基因居多，以凋亡相關基因PDCD5作為候選，在胃癌細胞系中分析PITX1對PDCD5轉錄水平的表達調控。綜上研究結果提示，PITX1參與胃癌細胞的生物學行為的變化，並以結合到基因啟動子區的方式調控下游基因TP73和PDCD5表達，且PITX1的表達水受miR-19a-3p的調控。本研究結果為胃癌發病機制的探討和胃癌的分子治療提供了理論依據和實驗基礎。
