PCR 邊緣效應

用大膠槽跑電泳時,出現膠塊(或泳道)的邊緣溴酚藍比膠塊中間的跑得快的現象。
根據本人跑膠的經驗,我覺得出現這種問題可能原因有:
1、制膠的梳子用久了已出現變型,使得加樣孔不處於同一平行,那么跑膠時溴酚藍就會出現不一樣快。
2、制膠後加電泳緩衝液時,注意不能讓緩衝液跑到膠底下,根據我以往的經驗,液體最容易跑到膠的底下兩側,使膠的邊緣與中間跑膠速度不一樣。
3、可能電泳儀出現了問題,不過這種可能比較小,建議使用其他電泳儀試一試。
4、溶膠的時間長一些,但是不能太長,以免膠被燒乾了。溶膠如果不能混勻的話,那么的話就很有可能出現邊緣效應。
5、電泳槽中的緩衝液最好超過膠1CM左右,否則緩衝液像中間泳,兩邊的電泳緩衝液就不均勻了。
6、溴酚蘭的量不要超過樣品的5分之一,溴酚蘭過量後跑的速度不一致
7、建議你MAKER跑中間的空,儘量不要點邊緣的孔。
8、晾膠時一定使其自然冷卻,不要冷卻的不均勻,會出現月牙型的圖形

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