《P53調控B細胞MicroRNA-1246表達及其在系統性紅斑狼瘡發病中的作用》是依託中南大學，由羅雙艷擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：P53調控B細胞MicroRNA-1246表達及其在系統性紅斑狼瘡發病中的作用
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：羅雙艷
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
系統性紅斑狼瘡（SLE）發病機制尚不明確，B細胞過度活化產生大量自身抗體在SLE發病中起重要作用。microRNAs可通過影響B細胞功能導致自身免疫性疾病的發生，而早期B細胞因子1（EBF1）可通過激活B細胞受體（BCR）信號通路促進B細胞發育、活化及增殖。我們前期研究發現SLE患者B細胞中microRNA-1246可通過調控其靶基因EBF1表達，激活BCR信號，從而參與SLE發病機制。P53可正向調控microRNA-1246表達，且P53可調控多種組蛋白乙醯轉移酶表達進而調控microRNAs表達。因此，我們提出SLE B細胞中P53通過改變microRNA-1246基因啟動子區乙醯化狀態，導致microRNA-1246低表達，從而使EBF1表達增高，最終促使B細胞過度活化及SLE發生與發展這一全新假說。本項目將有助於進一步闡明SLE發病的分子機制，並有望為SLE治療提供新的有效靶點。
結題摘要
我們的前期研究證實SLE患者B細胞中miR-1246表達降低在系統性紅斑狼瘡發病中扮演重要角色。但SLE患者B細胞中miR-1246低表達的分子機制目前尚不清楚。我們通過real time PCR和WB檢測發現SLE患者B細胞中P53表達水平明顯低於正常對照，且P53表達水平與miR-1246表達水平呈顯著正相關。ChIP-PCR及螢光素報告載體實驗證實P53與miR-1246啟動子存在結合作用。隨後通過Co-IP實驗，我們發現P53與P300、CBP、PCAF存在相互結合。SLE患者B細胞中P300、CBP表達水平明顯降低，PCAF無顯著差異。通過ChIP-qPCR證實，P53、P300、CBP、PCAF在SLE患者B細胞中miR-1246啟動子區結合明顯減少，且SLE患者B細胞中miR-1246啟動子區H3K9、H3K14乙醯化水平顯著降低。我們通過上調及下調P53的表達發現，在SLE患者B細胞中過表達P53，P53、P300、CBP 及PCAF與miR-1246啟動子區的結合明顯增多； miR-1246啟動子區H3K9/K14乙醯化明顯升高，miR-1246表達顯著增加；EBF1、CD40、CD80、CD86 表達水平明顯減少；轉染後的B細胞與自身CD4+ T 細胞孵育後分泌IgG水平明顯減少。在正常B細胞中干擾P53表達，隨著P53表達的降低，P53、P300、CBP 及PCAF與miR-1246啟動子區的結合明顯減少；miR-1246啟動子區H3K9/K14乙醯化明顯降低，miR-1246表達顯著減少；EBF1、CD40、CD80、CD86 表達水平明顯增多；轉染後的B細胞與自身CD4+ T 細胞孵育後分泌IgG水平明顯增加。我們的研究首次證實SLE 患者B細胞miR-1246啟動子區P53結合水平顯著減少，影響P300、CBP、PCAF結合到此區域，導致此區域H3K9/K14乙醯化水平降低，抑制了miR-1246的表達，並促使B細胞過度活化，產生抗體增多，從而參與SLE的發病。
