《Ovol2調節結腸癌侵襲轉移的機制研究》是依託廈門大學，由李博安擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Ovol2調節結腸癌侵襲轉移的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李博安
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Ovol2是含鋅指蛋白結構的轉錄抑制因子，我們之前的研究發現，Ovol2在組織發育中發揮重要作用，然而在腫瘤發生髮展過程中的作用仍然未知。本課題前期實驗發現， Ovol2在初期結腸癌細胞內抑制Wnt信號，同時Ovol2又是Wnt信號的正向靶基因。二者組成一個負反饋環使Wnt信號輸出維持在一定水平，抑制腫瘤侵襲轉移；我們還發現，隨著結腸癌的進展，Ovol2啟動子區發生甲基化，失去對於Wnt 信號的反應，導致其表達降低或消失，解除對於Wnt信號的抑制作用。因而，Wnt信號輸出高於門檻值而啟動EMT。另外，Ovol2通過抑制Notch1表達而抑制Notch信號，因此進展期Ovol2失活將通過Notch信號促進腫瘤Intravasation 滲入血管。本課題將從分子、細胞、常位腫瘤模型以及基因修飾小鼠腫瘤模型並結合臨床標本分析，系統研究Ovol2在結腸癌侵襲轉移發生中的作用及其相關的分子機理。
結題摘要
Ovol-2是進化上相當保守的一種轉錄因子，它與胚胎髮育之間的關係已經被很多研究所報導，但是Ovol-2與腫瘤的發生髮展關係還知之甚少。本文主要從Ovol-2是如何調控結直腸癌的轉移與侵襲方面做了詳細的研究。 首先我們從結直腸癌病人樣本的組織晶片中發現腫瘤中Ovol-2含量低的病人預後生存期更短。然後我們通過體外細胞增殖實驗、裸鼠皮下成瘤實驗、小鼠免疫組化實驗、HE染色實驗證實了Ovol-2不能夠抑制結直腸癌的增殖。於是我們猜測Ovol-2可能是通過抑制結直腸癌轉移和侵襲過程，延長患者的壽命。於是我們通過細胞劃痕實驗、Transwell實驗、裸鼠尾靜脈腫瘤細胞注射實驗、裸鼠原位腫瘤細胞注射實驗、HE染色實驗、免疫螢光實驗證實了Ovol-2能夠抑制結直腸癌的轉移。 接下來我們通過Oncomine資料庫篩查與腫瘤轉移有關與Ovol-2共表達的基因，通過免疫組化實驗、細胞免疫螢光實驗、蛋白印跡實驗我們證實了Ovol-2能夠抑制結直腸癌細胞的EMT進程。我們通過qPCR array找到了與Ovol-2相關性較高的關鍵蛋白SLUG。並通過免疫印跡實驗、螢光實時定量PCR實驗、細胞劃痕實驗、Transwell實驗、螢光素酶報告質粒活性檢測實驗證實了Ovol-2是通過抑制SLUG來抑制結直腸癌的EMT進程。我們通過點突變SLUG啟動子上的Ovol-2結合位點發現Ovol-2並不是直接負調控SLUG的表達，而是通過抑制Wnt信號通路的轉錄活性負調控SLUG的表達。 我們通過螢光素酶報告基因活性檢測實驗、免疫染色質共沉澱實驗、免疫組化實驗發現Ovol-2是Wnt信號通路的直接靶基因。由此我們提出Ovol-2與Wnt信號通路之間存在的負反饋作用在結直腸癌的轉移與侵襲中具有重要的調控作用。
