OLA1基因在乳腺癌轉移過程中的作用及分子機制

《OLA1基因在乳腺癌轉移過程中的作用及分子機制》是依託浙江大學，由鐘獻擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：OLA1基因在乳腺癌轉移過程中的作用及分子機制
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：鐘獻
• 項目類別：青年科學基金項目

項目摘要

乳腺癌是我國常見的惡性腫瘤之一。乳腺癌發生浸潤轉移和術後復發是制約其治療效果的主要因素。然迄今對乳腺癌轉移的具體分子機制尚待深入研究。本研究擬對在前期工作首次發現的與乳腺癌轉移密切相關的OLA1基因進行體內外的深入研究，運用基因晶片和蛋白晶片對高表達或knockdown OLA1基因的乳腺癌細胞進行差異表達分析，及酵母雙雜交技術篩選關鍵蛋白，分析OLA1基因在乳腺癌轉移過程中的作用和相應的分子機制，以及與ROS信息通路的關係，並進一步在裸鼠乳腺癌轉移模型、人乳腺癌原發灶和肺轉移灶組織中進行驗證。本課題對進一步闡明OLA1基因在乳腺癌的浸潤轉移機制，進一步明確乳腺癌發生、轉移及提高乳腺癌患者的生存期限和生活質量有重要意義。

結題摘要

通過三年的研究和探索，本課題緊緊圍繞項目研究方案和技術路線實施，基本完成預定構想和目標，主要完成情況和取得成果匯報如下：首先我們測定多種乳腺癌細胞系OLA1的mRNA和蛋白表達情況，並構建高表達和低表達細胞系，進行細胞遷移和侵襲實驗，結果表明高表達OLA1的細胞與對照細胞無明顯差異，OLA1 knockdown細胞的受誘導趨向侵入能力顯著下降，且對細胞遷移和侵入的影響並不是由於對細胞周期和生長的直接改變而引起的。運用Affymetrix基因晶片進行差異統計學分析並進行了驗證。通過構建含OLA1的重組逆轉錄病毒載體，將OLA1 shRNA序列克隆到逆轉錄病毒載體pLXSN中，生產重組逆轉錄病毒並感染乳腺癌細胞MDA-MB-231，構建成功特異的cDNA文庫。以Clontech公司酵母雙雜交技術為平台，構建酵母OLA1雜交篩選系統，篩選OLA1下游的靶蛋白，目前已得到十餘個陽性克隆，接著分別進行序列分析和比對，已鑑定得到兩個靶蛋白BRCA1及γ-tubulin。通過分子生物學手段已初步闡明調控的相關分子機理。 另外，ROS 作為信號傳導的中介，參與了腫瘤轉移的多個環節包括腫瘤細胞遷移和侵入。而 OLA1 對細胞內的 ROS 水平具有非常迅速的調節作用，我們的研究結果也表明OLA1通過調控 ROS 參與了乳腺癌細胞轉移過程。其影響乳腺癌細胞浸潤和轉移的最終效應可能與細胞骨架蛋白調控相關，尤其是紡錘體和中心粒及F-actin的聚合和解聚密切相關。進一步的體內動物實驗和人體組織標本也初步驗證了上述研究結果的正確性。 本項目取得的階段性研究成果：已發表國際學術論文3篇，其中SCI兩篇，國核心心期刊3篇，另有一篇論文已向國際學術期刊投稿。人才培養方面：已有1人獲得中青年人才培養計畫資助，參加國內學術會議交流2次，主要參與者赴美國知名研究機構學習，並參加國際學術會議1次。主要培養博士研究生2位，碩士研究生2位。