《Nkd在果蠅幼蟲發育階段抑制Wg信號通路及其分子機制》是依託東南大學，由方明擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Nkd在果蠅幼蟲發育階段抑制Wg信號通路及其分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：方明
- 依託單位：東南大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
抑制Wnt信號是生物醫學領域關注的焦點問題。反饋抑制是體內抑制Wnt信號的重要方式，而果蠅Nkd即是Wg信號通路的一種反饋抑制因子。儘管Wg信號廣泛誘導Nkd的表達，但一般認為Nkd對Wg的拮抗作用僅限於胚胎髮育階段。我們最近在果蠅翅發育模型中闡明了Dpp信號通過Brk-nkd的負調控環路抑制Wg通路的新模型(Yang et al., 2013)，說明nkd在發育後期存在必要作用。本課題將用果蠅遺傳學對nkd拮抗Wg信號通路進行深入研究，試圖澄清其幼蟲發育階段的作用。同時，我們在果蠅Kc細胞建立了Wg信號通路的定量觀察系統，經Wg配體瞬時激活Wg通路對螢光蛋白標記的Nkd和Arm/beta-Catenin進行含量和胞內定位的動態觀察，同時利用基於多種Wg靶基因構建的螢光蛋白報告基因實時記錄Wg的轉錄調控活性。通過動力學分析，我們預期可以獲得解讀Nkd功能的新線索。
結題摘要
抑制Wnt信號是生物醫學領域關注的焦點問題。本課題利用果蠅遺傳學對nkd拮抗Wg信號通路進行深入研究，試圖澄清其幼蟲發育階段的作用。鑒於傳統的nkd突變體在分子水平未得到精確地鑑定，我們通過Crispr/Cas9構建了新的nkd突變果蠅。我們的研究表明，過表達nkd可以抑制Wingless靶基因Distal-less的表達，以及wing notch表型；RNAi及突變體克隆則顯示Distal-less和Sensless表達的增加，同時，也在成蟲翅膀表現典型的Wingless信號通路增強的表型：ectopic bristles。這些結果清楚表明nkd在幼蟲發育抑制Wingless信號通路。我們還探討了nkd不同突變體對Wingless信號的影響以及nkd在細胞水平對Wingless靶基因表達動力學的影響。總之，根據這些結果我們得出結論，nkd對Wingless信號通路的抑制作用是廣泛的，對其分子作用機制的研究將豐富我們對Wg信號通路調控機制的認識。
