《Nbrgs-CaM與NbSGS3互作在雙生病毒致病性中的作用》是依託浙江大學，由王亞琴擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Nbrgs-CaM與NbSGS3互作在雙生病毒致病性中的作用
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：王亞琴
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Nbrgs-CaM是一個本氏煙內源抑制子，它不僅能抑制正義單鏈GFP誘導的轉錄後基因沉默與雙生病毒誘導的內源基因沉默，還能增強雙生病毒在本氏煙上的侵染，但其抑制RNA沉默與增強雙生病毒致病性的機理尚不清楚。我們前期研究發現Nbrgs-CaM與本氏煙基因沉默抑制子SGS3互作，本項目擬通過轉基因過表達與沉默NbSGS3，明確它在RNA沉默與植物抗病毒中的作用；分析Nbrgs-CaM與NbSGS3互作結構域，明確互作結構域與其抑制RNA沉默的相關性；分析Nbrgs-CaM競爭NbRDR6結合NbSGS3的能力及它對NbSGS3結合‘dsRNA’活性的影響；利用Nbrgs-CaM轉基因植株，分析Nbrgs-CaM對NbSGS3亞細胞定位及與NbRDR6互作的影響。本項目的開展有望解析Nbrgs-CaM抑制RNA沉默在雙生病毒致病性中的機理、豐富植物RNA沉默與內源RNA沉默抑制子的網路。
結題摘要
在擬南芥中，RDR6可與雙鏈 RNA 結合蛋白 SGS3 互作並形成複合體，在次級 siRNAs 合成中起重要作用。為了研究 Nbrgs-CaM 是否會影響 NbSGS3 的功能，我們克隆了 NbSGS3基因並對其功能進行分析。我們發現 NbSGS3 在正鏈 RNA 誘導的基因沉默、GFP系統沉默的建立及維持、雙生病毒誘導的基因沉默及雙生病毒的抗性方面起了重要作用，而且 NbSGS3 能夠協同 NbRDR6 參與對雙生病毒的抗性。此外通過酵母雙雜交與雙分子螢光互補實驗，我們還發現 Nbrgs-CaM 與 NbSGS3 能夠互作，並且 Nbrgs-CaM 的過表達不僅能夠影響 NbSGS3 的亞細胞定位，使其不能定位於‘siRNA-bodies’上，也會降低 NbSGS3 蛋白在植物中的表達水平。在本項目的資助下，我們明確了Nbrgs-CaM通過改變NbSGS3的定位模式以及降低其在細胞中的含量，從而使NbSGS3不能有效地幫助RDR6合成dsRNA，最終導致抑制RNA沉默與增強病毒的侵染。
