《NRSF-CART在缺血性腦損傷疾病修復中的作用研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由張靜擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：NRSF-CART在缺血性腦損傷疾病修復中的作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張靜
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
古柯鹼-苯丙胺調節轉錄肽CART在缺血性腦損傷中具有重要的保護作用。我們發現NRSF通過結合CART啟動子、內含子的NRSE元件抑制CART轉錄，缺血、缺氧損傷誘導NRSF表達上調、進而阻斷CART的神經保護功能，提示NRSF是神經損傷信號傳遞的重要因子，靶向敲低NRSF有望成為上調CART從而促進神經損傷修復的新策略。本項目擬在細胞水平（SK-N-SH細胞、皮質神經元）、組織水平（腦切片）建立模擬缺血、缺氧損傷的氧糖剝奪模型，利用實時定量PCR、蛋白質印跡等檢測NRSF、CART的表達變化；通過流式分析、Tunel染色等檢測神經細胞的凋亡率；在動物水平建立大鼠腦中動脈閉塞模型，通過側腦室注射或遞送系統對NRSF、CART進行干預，利用TTC、Tunel染色等測定腦梗塞面積和神經細胞凋亡率。該研究有助於闡明NRSF-CART軸在缺血性損傷及修復中的作用，為缺血性中風的治療提供新的科學依據。
結題摘要
古柯鹼-苯丙胺調節轉錄肽CART在缺血性腦損傷中具有重要的保護作用。我們前期工作發現NRSF通過結合CART啟動子、內含子的NRSE元件抑制CART轉錄，缺血、缺氧損傷誘導NRSF表達上調、進而阻斷CART的神經保護功能，提示NRSF是神經損傷信號傳遞的重要因子，靶向敲低NRSF有望成為上調CART從而促進神經損傷修復的新策略。 本項目的主要研究內容包括：1. 在細胞水平，利用SK-N-SH細胞、原代分離的小鼠皮質神經元建立模擬缺血、缺氧神經損傷的OGD模型，分析轉錄負調控因子NRSF如何與其它的轉錄激活因子如CREB等競爭性調節CART基因的表達，探討是否可以通過對NRSF、CART進行干預，從而減少缺血、缺氧導致損傷的神經元細胞凋亡、壞死數量；2. 在組織水平，製作大鼠腦切片，經OGD處理，分析NRSF、CART干預對腦片組織神經細胞生存率、凋亡率的影響；3. 在動物水平，建立大鼠MCAO模型，通過側腦室注射或遞送系統對NRSF、CART進行外源性干預，檢測NRSF、CART干預前後大鼠腦梗塞面積、殘存神經元細胞數、凋亡細胞數、血流動力學的變化，尋找缺血性腦損傷修復治療性方案的實驗依據。我們獲得的重要結果和關鍵數據如下：不同水平的實驗數據共同表明NRSF-NRSE可以有效地抑制cAMP/PKA/CREB正性調控作用的發揮，單純由OGD引起的NRSF表達的上調並不足以抑制cAMP/PKA/CREB正性調控作用的發揮，需要有外源性的NRSF干預；外源性干涉NRSF可以使神經細胞生存率顯著提高，添加Forskolin對CART進行聯合干預可以進一步提高神經細胞的生存率。 本研究將有助於利用NRSF與CART基因的負調控關係，探討在腦缺血、缺氧損傷狀態下，如何通過干預NRSF、CART基因的表達為中風等疾病的治療提供新的理論指導。
