NMHC IIA介導EB病毒感染鼻咽上皮細胞分子機制的研究

《NMHC IIA介導EB病毒感染鼻咽上皮細胞分子機制的研究》是依託復旦大學，由熊丹擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：NMHC IIA介導EB病毒感染鼻咽上皮細胞分子機制的研究
• 依託單位：復旦大學
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：熊丹

項目摘要

EB病毒與鼻咽癌密切相關。據報導非肌肉肌漿球蛋白重鏈IIA（NMHC IIA）是人類單純皰疹病毒進入上皮細胞的受體。我們運用三維培養技術成功建立了穩定高效的游離EB病毒感染永生化鼻咽上皮細胞模型株；運用Pull-Down、質譜分析、Co-IP、siRNA沉默等方法，發現NMHC IIA是EB病毒感染鼻咽上皮細胞的受體，但其介導EB病毒感染鼻咽上皮細胞的機制尚不清楚。我們擬在此模型株中，採用病毒結合、內化、細胞融合、共定位和蛋白磷酸化檢測晶片等技術，研究該受體介導EB病毒進入細胞可能的內吞途徑和信號通路；在鼻咽癌組織標本中，採用免疫組化和原位雜交等技術探討NMHC IIA的表達與EB病毒感染的相關性，結合患者臨床病理資料和隨訪結果，試圖闡明NMHC IIA介導EB病毒感染鼻咽上皮細胞的分子機制，尋找預防和治療鼻咽癌的分子靶標，為預防和治療鼻咽癌提供理論依據。

結題摘要

EB病毒主要感染B淋巴細胞和上皮細胞，與伯基特淋巴瘤、傳染性單核細胞增多症和鼻咽癌密切相關。EB病毒感染B淋巴細胞的分子機制已清楚，但感染上皮細胞的分子機制還有待闡明。我們以穩定高效的游離EB病毒感染永生化鼻咽上皮細胞模型株為基礎，創新性地發現NMHC IIA可以與EB病毒糖蛋白gH/gL的相互作用介導EB病毒結合到細胞表面，進一步採用抗體中和、共定位等方法確認了NMHC IIA是介導EB病毒感染鼻咽上皮細胞的受體。通過免疫組織化學染色，NMHC IIA在異常增生上皮細胞的膜上和細胞質中均有高表達，NMHC IIA表達與EB病毒感染異常增生上皮密切相關。採用表達譜晶片技術檢測和分析EB病毒感染永生化鼻咽上皮細胞前後的差異基因和信號通路，發現EB病毒感染與actin結合細胞骨架的調節有關，NMHC IIA 是與actin結合的細胞骨架蛋白，進一步說明EB病毒感染鼻咽上皮細胞與NMHC IIA有關。我們套用兔多克隆抗體製備技術，製備抗NMHC IIA 的特異性抗體，為鼻咽癌的分子靶向治療和研究NMHC IIA 在鼻咽癌中扮演的角色奠定基礎。進一步分析表達譜晶片和轉錄組測序數據及一系列實驗驗證，我們創新性地發現RSAD2在鼻咽上皮細胞中具有抗EB 病毒天然免疫的作用；首次發現RSAD2除了抗EB病毒複製功能外，還具有促進鼻咽癌侵襲轉移的生物學功能，為闡明EB逃逸宿主天然免疫機制提供實驗依據，為鼻咽癌的防治提供新的思路和靶點。