《Mitf作為人視網膜幹細胞一種新標誌物的研究》是依託復旦大學，由周國民擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Mitf作為人視網膜幹細胞一種新標誌物的研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周國民
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
視網膜來源於神經外胚層，受損後很難再生。人胚胎幹細胞來源的視網膜幹細胞，是細胞替代治療視網膜退行性疾病的重要種子細胞，但對其生物學特性，尤其是其特徵性標誌物卻所知甚少。為此，我們從早期人胚胎轉錄因子表達譜研究著手，通過大量篩查，發現在非常早期（胚胎第4周）的視網膜原基，即有轉錄因子MITF的高表達，並伴有眼區轉錄因子（EFTF）的高表達。業已知道，MITF為小眼畸形相關轉錄因子，是視網膜色素上皮（RPE）前體細胞的標誌物。而我們認為，MITF也很有可能是人視網膜幹細胞的標誌物。為驗證這一假說，我們擬在研究早期人眼發育轉錄因子表達譜的基礎上，構建Mitf-GFP人胚胎幹細胞報告細胞系，定向誘導分化為視網膜前體細胞，從中篩選、純化、擴增、鑑定人視網膜幹細胞，並對其生物學特性進行深入研究，為人視網膜早期發育的基礎理論研究，及視網膜退行性變疾病的細胞移植治療提供理論和實驗依據。
結題摘要
視網膜幹細胞是一類能保持未分化狀態並且能自我更新、產生視網膜各種類型細胞的細胞。在胚胎早期發育過程中，視網膜幹細胞居於視網膜細胞譜系的最頂端，最早產生的視網膜幹細胞能在不斷的發育過程中按照特定的順序產生出節細胞，水平細胞，視錐細胞，無長突細胞，視感細胞，雙極細胞和Mϋller膠質細胞。視網膜幹細胞對細胞替代治療視網膜神經退行性疾病帶來曙光。但目前對視網膜幹細胞的分子特性和內在特性仍所致甚少。我們的前期研究發現，早期人胚神經管側壁剛突出形成視泡時，Mitf 就出現了高表達，我們提出了Mitf 有可能是視網膜幹細胞的重要標誌這一假設。為了驗證這一構想，我們在先前早期人胚胎視網膜轉錄因子表達譜研究的基礎上，套用人胚胎幹細胞這一重要工具，在體外誘導分化成視網膜前體細胞過程中，採用分子生物學手段，對分化不同階段的細胞轉錄因子表達規律進行研究，以驗證Mitf 作為視網膜幹細胞重要標誌物的可能性，並以此標誌篩選視網膜幹細胞，為深入了解視網膜幹細胞的生物學特性及其臨床套用創造條件。研究結果表明，通過構建Mitf-GFP多能幹細胞報告細胞系，我們能從人多能幹細胞向視網膜細胞的誘導分化細胞中純化出視網膜幹細胞。經流式細胞技術分選，進一步對視網膜幹細胞的內在特性和分化潛能進行研究，發現早期分別加入bFGF和ActivinA後，可以有效的誘導分化到神經視網膜和色素上皮層，說明具有Pax6+/MITF+/Sox1-特性的細胞具有向神經視網膜和色素上細胞分化的潛力。經過RNA測序研究，我們對視網膜幹細胞的轉錄組，差異基因，細胞通路和差異表面分子都有了解。我們的研究為更深入了解視網膜幹細胞特性，為視網膜幹細胞的表面標誌物篩選和臨床實驗探索提供了依據。本研究共發表相關論文6篇。
