MeCP2在增齡性EPCs功能障礙中的作用及機制

《MeCP2在增齡性EPCs功能障礙中的作用及機制》是依託上海交通大學，由陳書艷擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：MeCP2在增齡性EPCs功能障礙中的作用及機制
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：陳書艷
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

MeCP2是廣泛表達於機體各組織細胞的一種轉錄抑制因子，在許多病理情況下存在MeCP2的表達失調。迄今MeCP2對EPCs的調控作用尚不清楚。我們前期研究結果表明：SIRT1對EPCs功能具有正向調控作用，衰老EPCs中MeCP2的表達水平升高而SIRT1水平下降。因此我們提出MeCP2可能通過抑制SIRT1表達影響EPCs功能的假設。為驗證這一假設，我們將通過人EPCs、大鼠衰老模型和小鼠動脈粥樣硬化模型，採用染色質免疫共沉澱、定量PCR、RNA干擾、基因過表達、Westernblot等手段，從分子、細胞、動物整體水平多方面明確MeCP2在衰老EPCs功能障礙中的作用，證實MeCP2通過抑制SIRT1表達影響EPCs功能，並進一步探討MeCP2對SIRT1的調控機制。本項目將從MeCP2這個新視點為揭示增齡性EPCs功能障礙的機制奠定基礎，為動脈粥樣硬化性疾病的防治提供新的思路。

結題摘要

EPCs衰老是血管衰老性疾病形成、發展過程中的初始變化和主要環節，然而衰老EPCs功能障礙的機制尚不清楚。本研究首先提取自然衰老大鼠的外周血EPCs和健康產婦的臍血EPCs，並採用持續傳代和H2O2建立複製性衰老和應激性早衰模型，通過CCK-8、細胞周期實驗、流式凋亡實驗、Transwell小室、劃痕和基質膠小管實驗發現隨EPCs衰老，細胞活性降低、增殖減弱、凋亡增加、遷移及血管形成能力受損，同時伴有MeCP2表達升高和SIRT1表達下降。然後構建過表達/沉默MeCP2和SIRT1的腺病毒並轉染EPCs後發現：SIRT1正向調控EPCs功能，而過表達MeCP2降低細胞功能和SIRT1表達，沉默MeCP2提高細胞功能和SIRT1表達，共轉染MeCP2和SIRT1則可逆轉，表明EPCs功能障礙與MeCP2表達升高並抑制SIRT1有關。最後探討MeCP2對SIRT1的調控機制，通過亞硫酸氫鈉甲基化測序和染色質免疫共沉澱實驗發現MeCP2靶向促進SIRT1啟動子區的DNA和組蛋白H3K9甲基化，從而抑制SIRT1轉錄。本課題為衰老EPCs功能障礙的機制提供了一個新的研究靶點，對防治血管衰老性疾病具有重要意義。