《MabrlA-Mawet途徑在綠僵菌產孢方式轉換中的調控機制》是依託重慶大學，由彭國雄擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：MabrlA-Mawet途徑在綠僵菌產孢方式轉換中的調控機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：彭國雄
- 依託單位：重慶大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
絲狀真菌產孢存在正常產孢和微循環產孢兩種方式，兩者可以發生轉換，但其轉換調控機制研究很少，調控途徑尚不清楚。綠僵菌是研究絲狀真菌產孢方式轉換的模式真菌之一。前期研究中，申請人敲除了綠僵菌正常產孢調控途徑（MabrlA-MawetA途徑）中8個基因，對其中4個基因的研究發現MabrlA、Mawet參與產孢方式轉換的調控。為了闡明該途徑在產孢方式轉換中的調控機制，本項目將進一步篩選途徑中產孢方式轉換調控基因；在正常產孢和微循環產孢培養基上，測定這些基因敲除轉化子的基因表達譜，篩選差異基因；通過基因敲除方法，確定與產孢方式轉換相關的新基因；採用定量RT-PCR方法，分析產孢方式轉換相關基因的調控關係，弄清與MabrlA-MawetA途徑相關的產孢方式轉換調控途徑，從而闡明MabrlA-MawetA途徑調控產孢方式轉換機制。本研究將加深對絲狀真菌產孢調控機制的理解，為提高孢子生產效率提供理論依據。
結題摘要
絲狀真菌產孢存在正常產孢和微循環產孢兩種方式，兩者可以發生轉換，但其轉換調控機制研究很少，調控途徑尚不清楚。綠僵菌是研究絲狀真菌產孢方式轉換的模式真菌之一。本研究採用基因敲除的方法，確定綠僵菌正常產孢調控途徑（MabrlA-MawetA途徑）中MabrlA參與產孢方式轉換的調控。為了闡明該MabrlA在產孢方式轉換中的調控機制，本研究分析MabrlA敲除後在正常產孢和微循環產孢培養基上與野生型（WT）的差異表達基因，其中上調錶達538個基因，下調錶達478個基因。Mac01240（磷酸轉移酶，MaPTS1）、MAC_02010、MAC_02940（C6轉錄因子MaC6）、Mac05756（鋅指蛋白Macc1）、MAC06509、MAC06816（轉錄因子MaFadA）表達差異在10倍以上。通過基因敲除技術，確定MaPTS1、MaC6、Macc1和MaFadA基因影響產孢。另外，在兩種培養基上發現編碼疏水蛋白（XP_007810716.1）的共同差異基因，在正常產孢過程上調錶達，而在微循環產孢過程中下調錶達，推遲這個基因可能參與產孢轉換過程。研究中採用Chip-seq技術進一步探索MabrlA參與產孢方式轉換的調控機制，構建了ΔMabrlA 菌株的C端帶有HA標籤的回覆菌株，通過Anti－HA抗體檢測到回復轉化子中表達MabrlA-HA蛋白，目前利用Chip-seq試劑盒純化的MabrlA-HA蛋白樣品正在進行測序，接下來工作分析在產孢轉化子MabrlA直接調控的下游基因。本研究將加深對絲狀真菌產孢調控機制的理解，為提高孢子生產效率提供理論依據。
