《MDPV和GPV感染宿主致病性差異的分子基礎》是依託揚州大學，由王建業擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：MDPV和GPV感染宿主致病性差異的分子基礎
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王建業
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
MDPV和GPV在基因組水平上具有很高同源性，但在感染譜上卻差異明顯。MDPV僅感染雛番鴨而不感染雛鵝，GPV不僅感染雛鵝也能感染雛番鴨，而且對後者致病力還要強於MDPV，這一致病性差異的機理一直未予闡明。先前研究中，我們構建了GPV 強毒株LH的感染性質粒pLH，本研究中，擬進一步構建MDPV 強毒株NY的感染性質粒pNY。在對MDPV和GPV基因組序列比對基礎上，擬在pNY和pLH質粒之間互換差異DNA片段，從而獲得一系列嵌合對方DNA片段的重組質粒，通過絨毛尿囊膜途徑轉染番鴨胚或鵝胚來拯救嵌合病毒，並在雛番鴨或雛鵝上進行毒力試驗來評估嵌合病毒的致病性，據此可以精確定位哪些DNA區域與MDPV和GPV的致病性差異相關聯。在此基礎上，擬對關鍵胺基酸或鹼基予以定點突變並驗證這些位點在致病性差異中的作用。闡明MDPV和GPV致病性差異的分子基礎對深入揭示水禽細小病毒的致病機理將發揮指引作用。
結題摘要
番鴨細小病毒（MDPV）與鵝細小病毒（GPV）之間同源性較高，但在對不同宿主的致病性上差異明顯，GPV對雛鵝和雛番鴨均可致病，而MDPV僅使雛番鴨致病而不感染雛鵝。在本項目研究中，擬在構建的MDPV感染性質粒pYY和先前構建的GPV強毒株LH株的感染性質粒pLH基礎上，通過片段交換重組，再通過轉染拯救生成嵌合病毒，通過研究嵌合病毒對雛番鴨和雛鵝的致病性，進而推斷出哪些基因片段在MDPV和GPV對雛番鴨和雛鵝的致病性差異上發揮關鍵作用。為了實現上述目標，首先構建了MDPV強毒株YY的感染性質粒pYY。pYY質粒轉染11日齡番鴨胚成功拯救出感染性病毒，拯救病毒具有與親本病毒相似的致病性，從而建立了感染性質粒構建-轉染拯救病毒-動物感染實驗的技術路線。在pYY質粒構建基礎上，本研究通過overlap PCR交換pYY和pLH之間的基因片段，構建了系列嵌合質粒，分別為pYY-gRep1、pYY-gVP1、pYY-gVP3、pYY-gRC、pLH-mVP1和pLH-mRep1，嵌合質粒分別轉染番鴨胚拯救出嵌合病毒，對嵌合病毒分別感染雛番鴨和雛鵝，統計15天觀察期內的致死率和生長體重。雛鵝感染試驗表明，攜帶MDPV VP1基因的pLH-mVP1病毒不僅對雛鵝表現出明顯致病性，甚至對雛鵝的致死率還要高於攜帶GPV VP1基因的pLH-mRep1病毒，但仍然不及pLH病毒對雛鵝的致病性。而pYY-gVP1病毒對雛鵝的致死率可達75%，死亡產生在接毒後9-13天，但無法觀察到雛鵝感染GPV後腸道纖維素性滲出和腸栓的特徵性病變。感染試驗表明MDPV和GPV在雛鵝上表現出的致病性差異，不僅與VP1蛋白相關，Rep蛋白和Rep-ITR的互作在其中也發揮重要作用。雛番鴨感染試驗表明，5個重組病毒對番鴨均具有致病性，但都不及GPV pLH病毒對雛番鴨的致病性強，表現為致死率不高，大多表現為發育遲緩受阻。其中，攜帶GPV VP1基因的pYY-gVP1的致病性高於pYY-gRep1和pYY-gRC病毒；而攜帶MDPV編碼基因的pLH-mRep1致病性略高於pLH-mVP1。感染試驗的結果可推斷：GPV對番鴨的致病性既與VP1相關，也與Rep蛋白以及其他順式作用元件（ITR、啟動子）之間的互作有關。
