《MBD1-siRNA逆轉EMT的實驗研究及對胰腺癌侵襲轉移的影響》是依託復旦大學,由徐近擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名:MBD1-siRNA逆轉EMT的實驗研究及對胰腺癌侵襲轉移的影響
- 依託單位:復旦大學
- 項目類別:青年科學基金項目
- 項目負責人:徐近
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
侵襲和轉移是影響胰腺癌預後的重要因素,而EMT與胰腺癌的侵襲轉移密切相關。本課題首先在TGF-β1體外誘導胰腺癌細胞BxPC-3發生EMT的過程中,動態監測EMT相關分子mRNA和蛋白的表達以及啟動子區的甲基化程度,研究EMT發生的甲基化相關機制;然後以甲基化結合域蛋白MBD1為靶點,設計合成MBD1-siRNA,靶向抑制MBD1基因的表達,檢測抑制前後EMT相關分子表達和啟動子區甲基化程度的改變,分析MBD1-siRNA逆轉EMT的機制;最後通過體內、體外實驗,觀察EMT發生及逆轉對胰腺癌細胞侵襲性和轉移能力的影響,較全面地認識MBD1作為甲基化調控新靶點在逆轉EMT中的作用,為將來進行基因治療胰腺癌侵襲轉移、改善胰腺癌預後提供理論基礎和實驗依據。
結題摘要
我們的實驗結果首先證實:MBD1在上皮型胰腺癌細胞株BxPC-3和SW1990中表達顯著低於間質為主型的胰腺癌細胞株PANC-1與AsPC-1;同時,穩定敲除PANC-1內的MBD1基因,則間質標記分子N-cadherin 和Vimentin表達明顯減少,上皮標記分子E-cadherin明顯上調,而在SW1990中過表達MBD1,則顯著上調間質分子Vimentin並下調E-cadherin。並且,原本具有間質型外觀的胰腺癌細胞PANC-1在敲除MBD1後,細胞間變得融合成團,彼此之間連線緊密,形成類似上皮型外觀。於是我們又進行了一系列體外細胞功能實驗進一步證實:胰腺癌細胞內MBD1的表達與增殖、運動和侵襲能力成正相關,而抑制MBD1表達,則細胞增殖、侵襲和運動潛能明顯受抑制。同時,針對敲除MBD1的胰腺癌細胞進行回補實驗,則能恢復其對細胞體外增殖、侵襲和運動潛能的抑制效應。深入機制探索後我們發現MBD1與組蛋白去乙醯化酶SIRT1結合緊密,並且這一結合能夠被經典轉錄抑制因子TWIST加強,ChIP和ReChIP實驗進而證實,MBD1與SIRT1功能複合體正是通過結合E-cadherin啟動子區域,使其啟動子局部發生異染色質化(euchromatin)從而表觀調控抑制了E-cadherin轉錄,說明了MBD1是通過與SIRT1結合後表觀抑制E-cadherin的轉錄從而起到誘導EMT的狀態,體外細胞實驗與組織標本染色也進一步驗證了這一機制,相關結果已成文並發表於Current Molecular Medicine雜誌(IF=5.02)。同時我們通過相關藥物試驗發現MBD1與胰腺癌治療抵抗密切相關,進一步實驗又發現MBD1與DNA雙鏈斷裂的標誌物γH2AX結合緊密,提示MBD1聚集於DNA損傷的區域。進而我們又發現,MBD1能夠與在DNA損傷修復中起募集修復因子功能的關鍵分子MDC1結合,並聚集到受損傷的DNA位點而引起一些DNA損傷修復因子的表達變化。提示MBD1可能是通過促進胰腺癌細胞的損傷修復從而影響其放化療抵抗的。相關結果已經成文,並已投送至International Journal of Oncology雜誌(IF=2.3)。以上這些結果進一步證實了:MBD1在表觀調控E-cadherin轉錄是胰腺癌細胞上皮間質化重要機制。