Long non-coding RNA MEG3分子對膠質瘤幹細胞調控作用的研究

《Long non-coding RNA MEG3分子對膠質瘤幹細胞調控作用的研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由胡昳暘擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：Long non-coding RNA MEG3分子對膠質瘤幹細胞調控作用的研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：胡昳暘
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

神經膠質瘤是中樞神經系統最常見的惡性腫瘤。膠質瘤幹細胞具有幹細胞相似特性，與腫瘤的多種惡性表型有關，是惡性腫瘤治療的潛在靶點，但調控膠質瘤幹細胞乾性的分子機制尚不明確。LncRNAs分子是非編碼RNA的一種，在基因表達調控過程中發揮著重要作用。研究表明MEG3在膠質瘤幹細胞中表達顯著降低，與膠質瘤的發展密切相關，同時其能夠協同蛋白分子調控ESCs的分化，因而MEG3可能對膠質瘤幹細胞存在調控作用。本研究擬在以往研究基礎上以膠質瘤幹細胞為對象，分析MEG3在膠質瘤幹細胞中的特異性表達，系統探討MEG3在膠質瘤幹細胞中敲減或過表達後對膠質瘤幹細胞的維持、增殖和分化等細胞生物學行為的影響，進而深入研究MEG3影響膠質瘤幹細胞的可能分子機制。這些研究對於深入理解膠質瘤幹細胞調控的分子機制和LncRNAs的調控作用，以及建立針對LncRNAs分子的膠質瘤幹細胞干預措施，具有重要的理論和實際意義。

結題摘要

膠質瘤幹細胞（GSCs）具有增殖快、可分化、易成瘤、耐藥及耐輻射等特點，因此被視為是膠質瘤惡性表型的根源和潛在的治療靶點。我們前期結果和文獻報告表明，LncRNA MEG3分子在膠質瘤細胞中表達顯著降低，與膠質瘤的發展密切相關。本項目擬在此基礎上系統探討MEG3分子對GSCs的調控作用和機制，對建立針對LncRNAs分子的膠質瘤幹細胞干預措施。項目在臨床來源的人GSCs上展開，包括MEG3分子在GSCs中的表達分析，對GSCs乾性的影響及調控GSCs的分子機制分析三方面的主要內容。目前我們檢測了腫瘤組織及其分離得到的GSCs中MEG3分子的表達，發現在10例中有9例樣品中GSCs的MEG3表達降低，其中6例具有統計學差異，提示MEG3分子在GSCs與腫瘤組織中存在著差異表達；此外，MEG3分子在正常腦組織中高表達，在膠質瘤和U87細胞系中低表達，且具有顯著性差異。在分析MEG3對GSCs乾性的影響方面，MEG3過表達使得GSCs的克隆形成能力顯著下降，自我更新能力降低，對GSCs的分化能力和方向並未產生顯著影響；EdU摻入實驗進一步提示MEG3的表達會顯著抑制GSCs的細胞增殖能力；幹細胞標誌物分子檢測顯示Nanog和c-Myc的表達顯著降低，Notch下游基因Hes1的表達下降，Notch信號的活性受到抑制。而在siRNA分子敲減MEG3後，GSCs的克隆形成能力和自我更新能力都有了顯著的提升。在分子機制分析方面，其下游分子P53和P21的表達顯著提高；下一步將採用RNA免疫共沉澱結合高通量測序技術，分析GSCs中與MEG3相互作用的mRNA和miRNA分子；前期研究證實 FHL-1分子能夠抑制Notch的轉錄活性，我們實驗發現FHL-1表現出與MEG3分子相同的作用，都能夠抑制GSCs的增殖，且MEG3分子過表達導致Notch信號通路下游分子Hes1表達降低。上述研究深入分析了MEG3分子在GSCs，膠質瘤細胞，正常腦組織的差異表達，初步確認了MEG3分子對GSCs的生物學特性具有調控作用。將進一步篩選出與MEG3分子相互作用的mRNA和miRNA分子，其中的靶向候選分子將作為下一步的研究方向；在測序篩選的基礎上，MEG3分子是否與Notch信號通路存在相互作用，亦可作為下一步的研究方向，以期闡明MEG3分子調控GSCs的作用和機制。