Laptm5作為ceRNA在小鼠B細胞淋巴瘤中的作用機制研究

《Laptm5作為ceRNA在小鼠B細胞淋巴瘤中的作用機制研究》是依託揚州大學，由張艷青擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：Laptm5作為ceRNA在小鼠B細胞淋巴瘤中的作用機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：張艷青
• 依託單位：揚州大學

項目摘要

miRNA通過結合mRNA的3'UTR區負調控靶基因的翻譯。一個miRNA可識別多個mRNA的3'UTR 區。當不同mRNAs被同一個miRNA所調節時，這些mRNAs之間具有競爭性結合miRNAs的關係，被稱為競爭性內源RNAs（ceRNAs）。本項目前期發現小鼠B細胞淋巴瘤中，c-Myc下調Laptm5，該蛋白可顯著抑制淋巴瘤細胞增殖，但其機制不明。由於在Laptm5的3'UTR區含有幾個miRNA的大量結合位點，可能對這些miRNA具有強大的吸納作用，並因此對miRNA的其他靶蛋白產生影響，具有ceRNAs的作用。本研究擬通過晶片及生物信息學技術篩選B細胞淋巴瘤中與Laptm5具有共同miRNAs結合位點的mRNAs，利用報告基因實驗驗證Laptm5通過競爭性結合miRNA影響對相關mRNAs的轉錄後調控，並通過體內外實驗探討Laptm5在小鼠B細胞淋巴瘤中的作用機制。

結題摘要

通過晶片檢測及實驗驗證發現c-myc基因可以負調控溶酶體相關蛋白5（Laptm5）；通過分別過表達溶酶體相關蛋白5（Laptm5）蛋白和其3’非編碼區（3’UTR），體內、體外實驗觀察到Laptm5蛋白及其非編碼的3’UTR均可抑制B細胞淋巴瘤細胞的生長；將Laptm5 3’UTR區包含的11個miR-17-3p的結合位點進行突變，觀察到突變型3’UTR對B細胞淋巴瘤的生長無抑制作用；將miR-17-3p過表達質粒和含有Laptm5 3’UTR的螢光素酶報告基因質粒共轉染細胞，雙螢光素酶報告基因檢測到miR-17-3p可靶向負調控Laptm5 3’UTR並可下調Laptm5的蛋白水平。高通量檢測過表達Laptm5 3’UTR的B淋巴瘤細胞內mRNAs的表達譜，與過表達空載體細胞進行對照，通過生物信息學分析，選取被Laptm5 3’UTR上調錶達，與細胞增殖、凋亡有關的基因，且經資料庫預測是miR-17-3p靶蛋白的基因進行進一步驗證。其中Mlk1可受miR-17-3p負調節，並且當Laptm5 3’UTR過表達時，MlK1的水平顯著上調，而Laptm5 3’UTR突變型過表達，MLk1上調不明顯。 除了上調Mlks，Laptm5 3’UTR還可通過影響miR-17-3p的調節上調Laptm5蛋白的水平。本項目在B細胞淋巴瘤中揭示了一個新的受c-myc基因調控的基因Laptm5，其3’UTR具有內源性RNA的作用，通過影響miR-17-3p對其靶蛋白（Laptm5和Mlk1）的調節，負調節B細胞淋巴瘤的生長。