《Kupffer 細胞中TGR5受體激活下調肝細胞內CYP7A1表達的分子機制研究》是依託鄭州大學，由婁桂予擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Kupffer 細胞中TGR5受體激活下調肝細胞內CYP7A1表達的分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：婁桂予
- 依託單位：鄭州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
膽汁酸代謝失衡是導致多種疾病發生的重要原因，其水平需要被嚴格調控。膽汁酸的G-蛋白偶聯受體又稱TGR5，是首個被鑑定的膽汁酸膜受體，在肝臟主要表達於枯否細胞內。我們的前期工作提示TGR5活化後可誘導枯否細胞TNFα和IL-1β的生成。而研究報導TNFα及IL-1β分泌後，可結合於肝細胞相關受體從而抑制膽汁酸合成的主要限速酶-CYP7A1的轉錄。因此，本項目擬進一步探討TGR5活化引發TNFα及IL-1β生成的機制是否與cAMP/EPAC/p38 MAPK胞內信號有關；並證實枯否細胞的TGR5活化後通過促進TNFα和IL-1β的生成，進而下調肝細胞內CYP7A1的轉錄，從而參與膽汁酸代謝的調節。以為膽酸失衡引發的疾病如高膽固醇血症、膽汁淤積、膽石病等提供新的治療方向和靶點，為膽酸及其衍生物在臨床上的套用提供重要的理論依據。
結題摘要
本課題主要研究TGR5 活化誘導IL-1β、TNFα 產生的機制是否與cAMP/EPAC/p38 MAPK 信號途徑有關，及TGR5 活化誘導IL-1β或TNFα生成後是否通過抑制CYP7A1 轉錄，從而參與了膽汁酸的代謝調節。 我們的實驗結果表明：1、TGR5的激動劑OA或MeCDCA處理後原代枯否細胞上清能明顯抑制肝細胞中CYP7A1的表達，OA或MeCDCA處理後枯否細胞中IL-1β和TNFα被誘導生成增加。2、分別在在原代、細胞株和動物模型中證明TGR5 活化可以誘導巨噬細胞分泌炎性因子IL-1β和TNFα。3、在細胞株及原代巨噬細胞中，激活TGR5後用信號傳導中涉及的分子的激動劑或阻遏劑，從多個層次證明：cAMP/EPAC/p38 MAPK及cAMP/EPAC/ JNK信號轉導途徑介導了TGR5活化後的炎症因子的生成。4、通過檢測TGR5 活化對蟲螢光素酶報告質粒pCRE-luc和pC/EBP-luc活性的影響，進一步證明：TGR5激活的信號通路下游傳導途徑的轉錄因子是c-Jun和ATF2。5、證實TGR5通過活化c-Jun和ATF2，從而增加了TNFα啟動子的活性。通過以上實驗我們可以得出以下結論：TGR5 活化誘導IL-1β或TNFα生成後，能抑制CYP7A1 轉錄；其機制與TGR5 活化後通過激活cAMP/EPAC/p38 MAPK及cAMP/EPAC/ JNK- c-Jun和ATF2信號轉導途徑誘導IL-1β、TNFα 產生，IL-1β、TNFα等炎症因子能在轉錄水平抑制CYP7A1的表達有關。 膽汁酸作為信號分子在體內發揮的重要作用，膽汁酸的水平在體內需被嚴格調控。我們的研究結果表明了TGR5有可能參與了膽汁酸負調控CYP7A1的過程，從而維持膽汁酸的代謝平衡。鑒於膽汁酸代謝在機體中重要作用，膽汁酸負反饋調節機制的闡明有利於為膽汁酸代謝失衡後引發的疾病提供防治手段，具有重要的理論意義和臨床套用價值。該研究加深了對膽汁酸負反饋調節的認識，為膽酸失衡引發的疾病如高膽固醇血症、膽汁淤積、膽石病和肝硬變等提供新的治療方向和靶點，也為膽酸及其衍生物在臨床上的套用提供理論依據。
