《KLF4參與調節骨髓幹細胞對皮膚創傷修復的機制研究》是依託華中科技大學，由鄭海擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：KLF4參與調節骨髓幹細胞對皮膚創傷修復的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：鄭海
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
骨髓幹細胞在皮膚創傷修復中起重要作用，但其調節機制不明， Krüppel樣因子4 (KLF4)，是新近發現的核轉錄因子,主要在胃腸道和其他上皮組織終末期細胞中高表達，參與調節正常細胞的分化成熟，抑制增殖。新近發現KLF4在人和鼠的胚胎幹細胞、骨髓幹細胞中也有表達，KLF4是否參與調節骨髓幹細胞對皮膚創傷的修復，目前尚不清楚。本課題擬通過構建KLF4/CreTM-Rosa26R/EGFP雙轉基因鼠及KLF4基因條件性敲除鼠，利用增強綠色螢光蛋白（EGFP）標記KLF4基因表達及KLF4基因被條件性敲除的骨髓幹細胞，通過流式細胞儀分析和細胞分選收集術，進行體內示蹤分析和體外分離純化移植試驗，研究在皮膚創傷修復過程中，KLF4在骨髓幹細胞中的功能，以期將KLF4作為新的骨髓幹細胞標誌物，發現更具幹細胞潛能的骨髓幹細胞，為改進骨髓幹細胞在皮膚創傷修復中的套用提供新的思路和理論依據。
結題摘要
核轉錄因子KLF4高表達於胃腸道上皮和皮膚等其他上皮組織，以前研究表明KLF4在皮膚形成屏障功能中必不可少，新近研究發現KLF4在維持成體和胚胎幹細胞自我增殖中起關鍵作用，KLF4還被用做體外誘導體細胞成誘導多能幹細胞(iPS) 。本課題我們首先培育KLF4啟動子驅動的增強型綠色螢光蛋白（ KLF4/EGFP ）轉基因小鼠和三苯氧胺誘導的KLF4基因敲除小鼠，發現KLF4在小鼠毛囊幹細胞富集的角質細胞中的高表達，利用KLF4/CreERTM and Rosa26RLacZ雙轉基因小鼠示蹤研究KLF4在傷口癒合的作用，發現KLF4表達細胞可能是來自於毛囊隆起幹細胞，KLF4表達多潛能細胞遷移到傷口，促進傷口癒合，KLF4基因敲出後，毛囊隆起幹細胞富集的細胞群數量減少，同時伴隨著顯著的皮膚創面癒合延遲。其次我們通過構建大鼠皮膚創傷模型及體外培養人臍靜脈內皮細胞（HUVECs），發現轉染KLF4 siRNA後，HUVECs的吸光度（A）值，遷移距離和成管環數顯著性降低。最後通過在無血清培養基中培養結腸癌來源的細胞系DLD -1獲得球細胞，這類細胞具有結腸癌幹細胞的特點，表達CD133、CD166、LGR5 及 ALDH1 ，相對於貼壁的DLD-1細胞具有更強的化療耐藥性，遷移，侵襲和成瘤能力。我們發現KLF4僅在球細胞中過表達，利用shRNA抑制KLF4表達後，這些細胞抵抗化學物質、遷移、侵襲及體內外成瘤能力減弱。球細胞減少KLF4表達也減少了結腸癌幹細胞標誌物和間質標記的表達。
