Ipr1與Mybbp1a相互作用的機制及其對細胞凋亡作用的研究

《Ipr1與Mybbp1a相互作用的機制及其對細胞凋亡作用的研究》是依託上海交通大學，由蔡雷擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：Ipr1與Mybbp1a相互作用的機制及其對細胞凋亡作用的研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：蔡雷
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

細胞凋亡是一個涉及多基因及其信號轉導途徑變化的複雜過程，了解有關基因信號轉導機制對尋找調控凋亡的關鍵靶點具有重要意義。Ipr1是在小鼠體內新發現的人類SP110同源物，可誘導李斯特菌感染的巨噬細胞發生凋亡；SP110可調節RARα轉錄活性，這提示Ipr1可影響RARα的凋亡信號轉導途徑。Mybbp1a是NF-κB抑制因子，NF-κB與凋亡關係密切，參與多種凋亡基因的轉錄調控。我們已證實Ipr1與Mybbp1a結合。但Ipr1和Mybbp1a之間相互作用機制及其對各自參與的信號轉導途徑之間存在什麼樣的聯繫尚不清楚，本項目擬採用GST pull-down, Co-IP, 螢光共定位等方法，研究Ipr1與Mybbp1a之間結合區域，分析作用位點；有針對性的考察Ipr1與Mybbp1a的結合分別對Ipr1和Mybbp1a 的蛋白功能及其相應信號轉導途徑的影響，進而闡明兩者相互作用對細胞凋亡的影響。

結題摘要

本項目研究的是結核病發生髮展過程中的分子機制，重點利用基因突變，蛋白質項目作用和計算機模擬等技術研究與凋亡相關的新基因及其調控凋亡的機制，以及新基因對人類肺結核病的作用影響。課題組開展了兩個與凋亡相關基因的研究:一個是核體蛋白Ipr1/SP110基因；另一個是神經髓鞘相關內質網蛋白Nogo-A基因。有關研究成果發表在在Human Genetics（IF：5.06），Molecular Medicine Reports（IF：1.48）和Clinical and Experimental Medicine（IF：2.824）上，並獲得國家發明專利的授權（CN201210203993.3/ CN102732623A）。主要重大發現如下：1、構建克隆了多個eGFP與Ipr1突變體融合基因，用慢病毒系統表達了eGFP-Ipr1突變體和Flag-Mybbp1a/pGEX-Mybbp1a融合蛋白等，利用GST pull-down，Co-IP方法分析了Flag-Mybbp1a與Ipr1各突變體蛋白的相互結合，結果發現Flag-Mybbp1a可以與eGFP-Ipr1△2（Ipr1的116位到180位胺基酸序列的基因片段）相結合，然而Ipr1第175位和177位的絲氨酸磷酸化位點的點突變體也可與Flag-Mybbp1a相互結合，這提示Ipr1第175位和177位的絲氨酸不是Ipr1與Mybbp1a相互結合的關鍵性胺基酸。計算機模擬計算出Ipr1中與Mybbp1a相互作用的關鍵性胺基酸位點支持這一結果。2、Ipr1與Mybbp1a的相互作用在不同巨噬細胞株中導致細胞產生凋亡的作用不是很顯著。3、我們利用702例肺結核病人與425例健康對照研究SP110，Mybbp1a和RelA基因與肺結核病的相關性及基因間的相互作用，結果發現SP110，Mybbp1a及這兩個基因的互作是中國漢族人群中肺結核病的重要致病因素。4、構建Nogo-A基因的siRNA慢病毒載體（LV-Nogo-A siRNA），在肝癌細胞株SMMC 7721中，將Nogo-A基因knock-down後，細胞的生長被抑制，細胞停留在G2/M期並發生凋亡。