《IFIT3通過TRAF3反饋調控I型干擾素誘導通路的機制研究》是依託上海交通大學，由扶瓊擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：IFIT3通過TRAF3反饋調控I型干擾素誘導通路的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：扶瓊
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
I型干擾素(IFN)誘導通路是免疫研究的熱點，目前觀點認為接頭蛋白TRAF3是多條IFN誘導通路的核心信號分子，但相關信號轉導事件仍未完全闡明。IFIT3是I型IFN誘導基因之一，其功能尚不清楚。我們在預實驗中發現IFIT3能調控單核細胞在Toll樣受體刺激下IFNα的表達；免疫共沉澱(Co-IP)實驗證實IFIT3蛋白能與TRAF3蛋白相互作用，提示IFIT3可能通過TRAF3發揮對I型IFN誘導通路的反饋調控。在此基礎上，本課題擬建立不同I型IFN誘導通路的細胞模型，採用過表達及RNAi技術改變細胞內IFIT3水平，從轉錄因子活化、IFNα啟動子活性、mRNA及蛋白質水平變化等多層次研究IFIT3對I型IFN通路的效應；並採用Co-IP技術分析IFIT3對TRAF3及其他I型IFN誘導通路信號分子的影響，以明確IFIT3的作用機制，為最終闡明I型IFN誘導通路的信號調控做一積極的探索.
結題摘要
背景： 系統性紅斑狼瘡（SLE）是自身免疫性疾病的原型，其病因及發病機制仍不清楚。近年研究表明：I型干擾素及其誘導基因在SLE的發病機制中起著關鍵性作用，然而，其確切的致病機制尚未完全弄清。IFIT3是I型干擾素系統的代表性基因之一， 其生物學功能及作用機制目前不清楚。 主要內容：我們採用過表達和慢病毒介導RNAi技術的使IFIT3過表達或表達抑制，研究其對I型干擾素系統及TLR通路下游多種趨化因子及炎症因子的影響。採用免疫共沉澱、螢光共定位等方法研究了IFIT3與TRAF3IP3及TRAF3蛋白的相互作用，並使用逐一突變TRAF3的主要結構域，探索了TRAF3蛋白與 IFIT3相互作用的特定功能域，進一步闡明了IFIT3可能通過與TRAF3相互作用參與對I型干擾素系統的調控。此外，構建穩定過表達IFIT3的小鼠單核巨噬細胞RAW264.7細胞系；並採用RNAi技術抑制小鼠原代骨髓巨噬細胞及RAW264.7細胞中IFIT3的表達，從正反兩方面探討IFIT3對單核巨噬細胞在LPS刺激下RANTES、IP-10等趨化因子表達的影響。隨後，採用Western Blot篩選LPS下游主要信號通路p38、JNK、IRF3、NF-κB等通路的活化，並使用螢光素酶報告基因、凝膠滯留實驗等方法對NF-κB的活化狀態進行進一步分析。接著，使用PDTC阻斷NF-κB通路活化，在此基礎上觀察IFIT3對RANTES、IP-10等趨化因子的影響。 重要結果：1. 建立了不同I型IFN誘導通路的細胞模型。 2. 成功採用IFIT3 RNAi重組慢病毒在THP-1細胞中抑制IFIT3表達，發現IFIT3基因沉默能顯著下調THP-1在多種TLR配體刺激下RANTES、IP-10、MCP-1、MIP-1α等趨化因子；CCR5、CCR7等趨化因子受體以及IFN-α、IL-1β等炎症因子的表達。 3. IFIT3蛋白能夠與TRAF3IP3及TRAF3蛋白相互作用；TRAF3蛋白與IFIT3的相互作用依賴於完整的TRAF結構域（TRAF-N及TRAF-C結構域）。 4. IFIT3可能通過與TRAF3 相互作用，上調IRF3通路，從而參與I型干擾素系統地調控。 2.IFIT3能夠增強單核巨噬細胞在LPS刺激下RANTES、IP-10等趨化因子的表達，抑制IFIT3表達能顯著下調上述趨化因子的釋放。I
