Hsa-miR-146在TLR介導牙周炎症反應的調控作用及機制初探

項目摘要

牙周炎是微生物引起的感染性疾病。由於具體致病機理尚不明了，導致治療手段匱乏，局限於機械性治療，缺乏有效調控宿主免疫的治療。miRNA可通過轉錄後水平調節mRNA表達，調節炎症免疫等多重功能，但其表達具有組織特異性。目前未見其在牙齦組織中表達狀況及對牙周炎症反應調控作用的報導，需展開深入研究。.本課題組前期工作以晶片比較炎症與健康牙齦組織，篩選出了數條炎症相關miRNA，其中miR-146與牙周TLR信號傳導關係密切。本研究以miRNA為切入點，擬檢測各種炎症程度及牙周炎類型的牙齦組織中炎症相關miRNA表達狀況，為繼續探討牙周炎個性化治療提供實驗數據。並以miR-146為新視點，採用基因轉染、蛋白印跡、定量PCR和ELISA等分子生物學方法，探討miR-146在TLR介導牙周炎症反應的調節作用，並初步闡明miR-146對TLR介導炎症信號通路的調控機理，為深入探索牙周免疫治療提供新思。

結題摘要

背景： miRNA可以調控各種炎症和免疫反應，但其對牙周炎症調控作用不甚清晰。在人牙齦成纖維細胞(human gingival fibroblasts, HGFs)，Toll樣受體4(Toll like receptors 4, TLR4)可識別細菌脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)激活下游信號並引起炎症因子釋放。本研究的目的是先從各種類型、不同炎症程度牙齦組織篩選牙周炎相關miRNAs，然後檢測HGFs內miRNA-146表達，並探索LPS誘導下miRNA-146對HGFs TLR4信號傳導的調控作用。方法：（1）miRNA晶片方法比較健康與炎症牙齦組織中miRNA表達譜差異，篩選出與牙周炎症、免疫關係密切的miRNAs，檢測慢性牙周炎（Chronic Periodontitis, CP）、侵襲性牙周炎（Aggressive Periodontitis, AgP）輕、中、重度炎症牙齦組織中炎症相關miRNAs表達差異。（2）酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測轉染miRNA-146a/b抑制劑前後HGFs白介素-1β(IL-1β), 白介素-6 (IL-6) 和腫瘤壞死因子-α (TNF-α)表達水平的變化。並用western blot和定量PCR的方法檢測miRNA-146可能的靶分子IRAK1和TRAF6的表達。螢光素酶報告檢測miRNA-146是否可以直接結合IRAK1的3’-UTR（3）HGFs經P.g LPS刺激後，western blot檢測TLR4信號通路上的激酶，用相應抑制劑和激活劑阻斷或激活相應激酶，觀察miRNA-146a/b、IL-1、IL-6和TNF-α等表達水平。結果：（1）炎症和健康牙齦存在明顯不同的miRNAs表達譜，91條miRNAs表達上調＞2.0倍， 34條miRNAs下調2~5倍。其中與炎症反應關係密切有12條miRNAs；CP和AgP輕、中、重度炎症牙齦組織中炎症相關miRNAs表達均存在明顯差異；（2）miRNA-146a/b在P.g LPS刺激前後表達差異明顯，抑制miRNA-146a和miRNA-146b-5p水平會導致IL-1、IL-6和TNF-α分泌增加，IRAK1的mRNA和蛋白水平也呈現上調，但TRAF6表達無明顯變化

Hsa-miR-146在TLR介導牙周炎症反應的調控作用及機制初探

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