《HIV gp41的NHR區新靶點的確證及高效干預》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由戴秋雲擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：HIV gp41的NHR區新靶點的確證及高效干預
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：戴秋雲
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
HIV gp41的NHR區與CHR區形成六束螺旋結構是HIV病毒進入靶細胞的關鍵途徑，NHR區結合靶點的鑑定對確定gp41的融合機理及抑制劑設計具有重要意義。本課題前期工作發現gp41 CHR區Try628上游７個胺基酸的多肽CP32M等具有很高的融合抑制活性，並與相應的NHR肽T21形成非常穩定的六束螺旋，提示gp41 NHR區可能含有新的結合靶點。本課題通過合成帶有半胱氨酸的CP32M及NHR肽、不同長度包含Trp628前７個胺基酸的CHR肽，表達包含完整NHR區、CHR1-5個七元重複區及其連線區的gp41 膜外區，用圓二色譜、色譜、超速分析離心等方法測定NHR及CHR肽相互作用，確定NHR區新靶點在發動NHR與CHR融合的關鍵作用。結合CP32M的抗病毒活性、N36/C34及NHR肽三聚體晶體結構及分子模擬方法，設計合成新型CP32M變體並測定活性，獲得NHR新靶點的高效干預方法。
結題摘要
本課題為闡明HIV-1 gp41的CHR與NHR相互作用機制及設計高效抑制劑，開展了CHR肽CP621-652與NHR肽T21的雙螺旋複合物結構取向、CP621-652 N端前７個胺基酸對抑制活性的貢獻、CP32M（CHR肽，CP621-652突變體）對中國HIV流行病株活性、耐藥性以及結構活性關係、新型融合抑制劑的設計合成等系列工作，得到如下主要結果：（1）CP621-652與T21形成螺旋二聚體的取向為反平行螺旋二聚體結構；（2）CP621-652 N-端前7個胺基酸是關鍵結合區，含該區的11個胺基酸片段就可與T21具有明顯的相互作用；（3）CP621-652 N-端前7個胺基酸的Gln1、Asn4、Met6是關鍵胺基酸；（4）CP32M中部及C端i與i+4位置引入Lys增加Glu-Lys離子對作用後，肽活性降低，用C34的C端胺基酸序列NEKDLLE及可與gp120結合的序列RINNIPWSEAM置換QIWNNMT後，多肽仍有很高活性，提示CP32M的VEWNEMT含有共性結合區；（5）CP32M對19種中國HIV流行病株假病毒、3種蛋白酶、逆反轉錄酶抑制劑耐藥株具有很高抑制活性，顯著高於目前臨床用CHR肽T-20，並具有較低的耐藥性；（5）套用三種表達載體（pSUMO、pGEX-6p-1、pET-28a）表達了帶有融合標籤的HIV gp41的五段截短片段；（6）基於篩選合成了6個新型抗HIV-1多肽，設計了可能同時作用於gp41及gp120的小分子-CP621-652的雙功能分子，目前已合成部分關鍵中間體。上述工作對闡明CHR肽CP621-652的前7個胺基酸貢獻、作用機制以及CP32M構效關係、CP32M的進一步藥物發展具有重要意義。目前為止，本工作發表標註該基金資助的國內論文3篇，申請國家發明專利一項，外刊論文正在整理中。
