《Glycodelin蛋白對黑素瘤局部T細胞的免疫抑制作用研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由任素萍擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Glycodelin蛋白對黑素瘤局部T細胞的免疫抑制作用研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：任素萍
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
Glycodelin蛋白是妊娠早期對抑制母體免疫和促進胚胎植入起關鍵作用的一個淋巴細胞功能調節分子。我們近期報告了glycodelin基因在惡性黑素瘤高水平表達，並促進腫瘤細胞的生長、遷移和侵襲。鑒於腫瘤侵蝕和胚胎植入過程的相似性，我們推測黑素瘤細胞通過合成和分泌過量的glycodelin蛋白抑制淋巴細胞的免疫功能，誘導產生局部免疫耐受，使得腫瘤逃脫免疫殺傷並得以生長和轉移。T淋巴細胞介導的細胞殺傷在黑素瘤腫瘤免疫中處於核心地位，本研究將著重探討glycodelin蛋白對T細胞的免疫抑制作用：利用細胞模型檢測glycodelin蛋白對T細胞活化、增殖、凋亡和特異性殺傷功能的影響；利用免疫重建動物模型對體外結果進行驗證；同時分析glycodelin蛋白的糖基部分，確定其亞型。以上研究對闡明腫瘤局部免疫耐受形成的機制具有重要意義，將為控制腫瘤生長、探索更好的免疫新療法奠定基礎。
結題摘要
惡性黑素瘤是皮膚黑素細胞系統所發生的惡性程度最高的腫瘤之一。儘管近年來生物科學在各個領域迅猛發展，黑素瘤的臨床治療手段卻沒有根本的改進，死亡病例高達皮膚癌所致死亡的80％，因此深入分析黑素瘤的發病機制，探索有效的治療方案非常重要。本研究擬對Glycodelin促腫瘤發展的免疫機制進行分析和探索。 Glycodelin最早是從人類胎盤、羊水、懷孕期子宮蛻膜中發現並分離出的一種糖蛋白。根據人類基因組計畫基因命名委員會（Gene NomenclatureCommittee）的建議，將glycodelin 的多個名稱統一命名為 PAEP（progestagen-associated endometrial protein）。以下敘述均採用PAEP代替glycodelin。大量的研究表明，它能夠抑制T細胞的免疫活性，對妊娠期母體免疫耐受的建立和HLA半相合胚胎植入起重要的調節作用。我們以往的研究發現PAEP基因在惡性黑素瘤組織和及體外培養的細胞系中高水平表達，對腫瘤細胞的遷移侵襲具有促進作用。鑒於腫瘤侵襲和胚胎植入的相似性，我們推測存在這種可能：高表達的PAEP對T細胞具有負性調節作用，使得腫瘤細胞逃脫了免疫細胞的監視和殺傷而迅速發生浸潤轉移。 為了證明這個假設，我們從以下三方面進行了研究：1. 採用RT-PCR和Western blot檢測PAEP在黑素瘤細胞系中的表達；2. 利用PAEP siRNA和shRNA重組慢病毒感染腫瘤細胞，下調PAEP的表達並獲得PAEP表達抑制的穩定細胞系，為下一步實驗提供蛋白樣品及細胞模型；3. 分離人外周血單個核細胞及純化的CD8+ T細胞，分別將PAEP蛋白或PAEP表達抑制的腫瘤細胞與淋巴細胞混合，與對照組相比觀察淋巴細胞的增殖、凋亡和腫瘤殺傷功能的變化。實驗結果顯示：1. 分別從mRNA和蛋白水平證實了PAEP基因在黑素瘤細胞系的表達；2. PAEP siRNA顯著降低了PAEP mRNA的表達；通過慢病毒轉染獲得了PAEP表達抑制的穩定細胞系；3. PAEP條件培養上清加入體外活化的淋巴細胞後，細胞增殖明顯變慢，細胞凋亡比例增加；4. 經PAEP表達抑制的腫瘤細胞誘導的效應淋巴細胞對腫瘤細胞的殺傷率明顯高於對照組。體外實驗表明PAEP蛋白抑制淋巴細胞增殖和細胞毒作用，增殖抑制作用可能由促凋亡引起。
