Gli1在胃癌中的作用及其表觀遺傳學調控研究

《Gli1在胃癌中的作用及其表觀遺傳學調控研究》是依託上海交通大學，由朱正綱擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Gli1在胃癌中的作用及其表觀遺傳學調控研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：朱正綱
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

胃癌發表率高，預後差，療效不滿意，原因在於病因和發病機理還不清楚。我們前期的研究發現轉錄因子Gli1蛋白參與胃癌的發生髮展，但Gli1在胃癌的過表達機制仍不清楚。本研究首先檢測胃癌組織及其對應癌旁組織中Gli1表達水平，並分析其與胃癌臨床病理參數之間的關係，然後通過過表達和下調錶達Gli1，觀察胃癌細胞增值生長、侵襲轉移以及細胞周期等生物學行為變化；通過生物信息學分析找出調控Gli1表達的候選microRNA（miR-129、miR-133b、miR-202），然後研究候選microRNA對Gli1的表達調控。本研究不僅有助於闡明胃癌發生髮展的機制，還有可能為胃癌的早期診斷治療提供新的靶點。

結題摘要

本項目旨在通過對miRNA的研究從基因表達的轉錄後水平研究胃癌中Gli1的表達調控機制，探討以Gli1為靶標的miRNA在胃癌發生髮展過程中的作用機制。我們利用生物信息學的工具，結合文獻及胃癌中異常表達的miRNA譜進行比對分析，初步篩選出miR-202-3p、miR-133b、miR-129-2-3p。結合雙螢光素酶報告基因系統、qRT-PCR和Western blot等檢測方法，驗證出這3條miRNA均可直接靶作用於Gli1 mRNA的3’UTR，對Gli1蛋白表達分別有不同程度的抑制，同時對Gli1的mRNA表達水平均無明顯影響。然後我們採用qRT-PCR檢測miRNA在胃癌組織及配對癌旁組織、胃癌細胞株中的表達水平，分析其與胃癌臨床病理特徵之間的關係，觀察其過表達對胃癌細胞增殖、周期、凋亡、侵襲、遷移和裸鼠體內成瘤能力等生物學行為的影響。結果我們發現miR-202-3p在68%（102/150）的胃癌組織中的表達低於其在配對癌旁對照組織（P＜0.05），表達水平與胃癌腫瘤大小呈負相關，miR-202-3p在胃癌細胞株MKN-28和BGC-823中表達較低，上調其在這兩株細胞中的表達可抑制細胞的體外增殖和克隆形成並誘導細胞凋亡；過表達miR-202-3p能夠通過促進凋亡來抑制MKN-28細胞在裸鼠皮下成瘤。miR-133b在70%（98/140）的胃癌組織中的表達低於配對癌旁組織（P＜0.05），表達水平與淋巴轉移分級呈負相關。miR-133b在胃癌細胞株中的表達水平明顯低於在永生化胃黏膜上皮細胞GES-1，在胃癌細胞株MKN-28和SGC-7901中表達較低，在這兩株細胞中上調miR-133b表達可抑制細胞的體外遷移和侵襲能力；miR-133b可抑制MKN-28細胞在裸鼠腹腔內的轉移。miR-129-2-3p在80% (120/150)的胃癌組織中的表達低於其在配對癌旁對照組織（P＜0.05）；miR-129-2-3p的表達水平與胃癌腫瘤的部位相關；上調miR-129-2-3p在MKN-28細胞中的表達可抑制其體外增殖和克隆形成並阻滯細胞周期，抑制其在裸鼠皮下成瘤。 部分研究結果已發表在SCI上，兩篇均IF3，培養的研究生中，一名博士順利畢業。