《GRP78調控自噬參與視網膜色素上皮細胞存活機制研究》是依託上海交通大學，由馮競仰擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：GRP78調控自噬參與視網膜色素上皮細胞存活機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：馮競仰
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
視網膜色素上皮（RPE）的損傷和死亡是乾性年齡相關性黃斑變性（AMD）病理改變的始動環節，其機制複雜且未完全明了。課題組前期通過A2E聯合藍光體外模擬乾性AMD，發現內質網應激介導的凋亡途徑參與了RPE細胞損傷和死亡過程；同時透射電鏡觀察到RPE細胞自噬水平異常變化，且與內質網應激分子伴侶GRP78表達趨勢相關。新近發現自噬是一種重要的細胞內源性防禦機制，推測GRP78通過調控自噬幫助RPE細胞應對內質網應激。以此為基礎，本項目採用現有體內外乾性AMD模型，首先通過雙向調節自噬，明確其在內質網應激介導的RPE細胞凋亡中作用；其次利用過表達/基因沉默技術，研究GRP78與自噬以及RPE細胞存活的相關性；最後通過分步基因干擾檢測GRP78/AMPK/mTOR信號通路表達，闡明GRP78調控自噬的分子機制。課題的完成將完善乾性AMD中RPE細胞凋亡/存活的分子機制，也為藥物研發提供新思路。
結題摘要
視網膜色素上皮（RPE）在維持視網膜穩態和視功能中起著至關重要的作用。年齡相關性脂褐素A2E的積聚並在藍光誘導下致RPE細胞損傷是視網膜退行性疾病共同的始動環節。課題組前期研究發現，內質網應激參與了A2E及藍光誘導的RPE細胞損傷過程，同時透射電鏡觀察到細胞內自噬水平變化。本課題研究中通過Western blot、免疫螢光染色等方法發現RPE細胞損傷後自噬水平升高。進一步，運用慢病毒干擾內質網應激分子伴侶GRP78表達，發現AMPK磷酸化水平降低，同時磷酸化mTOR活性增強，從而下調了RPE細胞自噬水平。此外，抑制自噬增加了A2E及藍光誘導的RPE損傷。相反，自噬激動劑雷帕黴素能減輕內質網應激相關凋亡蛋白CHOP和caspase-12表達，一定程度上保護RPE細胞。本課題初步揭示了GRP78通過AMPK/mTOR通路調控自噬是RPE細胞重要的內源性保護機制之一。課題的的完成將完善視網膜退行性疾病中RPE細胞凋亡/存活的分子機制，進而為視功能保護提供理論依據。
